[發明專利]一種基于殼聚糖的可調控抗原釋放速率的納米疫苗及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201810135821.4
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108379239A
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發明（設計）人: 楊成彪;劉利新;陳永明
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K39/00;A61K47/36;A61K47/30;A61P37/04;A61P35/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

本發明屬于醫藥技術領域，提供了一種基于殼聚糖的可調控抗原釋放速率的納米疫苗及其制備方法和應用。該納米顆粒通過快速納米絡合的方法制備，其可實現對抗原的高效共包裹。該納米疫苗以蛋白作為抗原；在特定pH值下改變殼聚糖和三聚磷酸鈉的比例制得表面電荷、納米粒徑、載藥量均相同的納米疫苗，其對抗原的釋放速率不同；抗原釋放快的納米疫苗促進抗原的呈遞，進而誘導機體產生更強的免疫應答，能夠更有效地抑制腫瘤的生長。所述納米疫苗易于制備、成份可控、可大批量連續生產。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，更具體地，涉及一種基于殼聚糖的可調控抗原釋放速率的納米疫苗及其制備方法和應用。

背景技術

癌癥已經成為嚴重威脅人類健康的疾病，在癌癥預防和治療領域，疫苗已經展現出來極大的希望。隨著免疫學的不斷深入研究、日益成熟的基因工程技術以及合成技術的飛速發展，人類已研制出多種DNA重組疫苗、短肽疫苗等新型疫苗。這些新興的疫苗雖然有很多優點，例如易于合成、提純、抗原特異性強，但其較弱的免疫原性卻成為其致命的缺點，導致其不能誘發強有力的免疫反應，限制了其在臨床上的使用。在實際應用中，其往往需用免疫佐劑來增強其免疫原性或增強宿主對抗原的特異性應答；但這些疫苗佐劑存在毒副作用大，體內易降解等缺點。由于癌癥的年輕化趨勢以及老年群體對癌癥的易感性，提高年輕機體和老年機體的免疫應答尤為重要。然而，目前的疫苗尚不能誘導有效的免疫應答來對抗癌癥，尤其是在老年機體中。

生物材料已經被用來提高其安全性和效率，如乳液、水凝膠和微粒，但這些材料均容易引起機體發生T細胞的免疫耐受和耗竭。然而，納米顆粒作為抗原的載體可靶向輸送疫苗至特定組織，如淋巴結；延緩抗原的降解；降低佐劑的毒副作用。殼聚糖是帶正電的天然多糖，自然界含量豐富，生物相容性良好，價格便宜。基于殼聚糖的納米顆粒制備可在水相中通過正負電交聯的方式完成，并實現對生物制劑的高效包載以及高效地保留生物制劑的生物活性。因此，我們利用快速納米絡合技術制備基于殼聚糖的納米疫苗。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種負載蛋白抗原和疫苗佐劑的納米顆粒。

本發明的另一個目的是提供一種負載蛋白抗原和疫苗佐劑的納米顆粒的制備方法。

一種負載蛋白抗原和疫苗佐劑的納米顆粒，利用帶正電荷的平均分子量90 K的殼聚糖，與帶負電的三聚磷酸鈉交聯包裹抗原形成納米疫苗。

本發明納米顆粒中的殼聚糖在pH = 5.3條件下具有良好的水溶性，可與不同質量比的三聚磷酸鈉交聯形成納米顆粒；（雞卵清白蛋白）OVA作為一種模式蛋白。

優選地，所述殼聚糖的平均分子量為50 kDa～90 kDa (優選為90 kDa)，其可與三聚磷酸鈉交聯形成穩定的納米顆粒。

優選地，所述納米疫苗的粒徑為50～200 nm（優選為50 nm）。

優選地，所述納米疫苗的PDI為0.1～0.2。

優選地，所述納米疫苗的電位為-5 mV～-30 mV。

優選地，所述納米疫苗的載藥量為10%～30%。

優選地，所述納米疫苗還包含藥學上可接受的賦形劑。

優選地，所述納米疫苗為凍干制劑。

本發明還請求保護所述納米顆粒在制備抗腫瘤藥物中的應用。

一種抗腫瘤納米疫苗制劑，包含上述任一所述的負載抗原的納米顆粒。

本發明負載抗原具有靶向淋巴結的功能，提高了疫苗在淋巴結內的富集，提高了疫苗被抗原呈遞細胞的攝取，抗原釋放速度快的納米疫苗促進了抗原的呈遞，提高了機體的抗原特異性Th1型免疫應答，以及記憶性免疫應答，在癌癥預防的應用中展現出了良好的效果。所述納米疫苗可高效包裹抗原，可連續大批量生產，成分明確。