[發明專利]一種仙客來雜交育種方法

在審

• 申請號: 201810132646.3
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108184655A
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發明（設計）人: 劉慶超;王奎玲;劉慶華;曲健;郝青;馬穎杰
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;C12Q1/02;G01N21/78;G01N21/84
• 代理公司: 青島智地領創專利代理有限公司 37252
• 代理人: 申傳曉

本發明公開了一種仙客來雜交育種方法，其包括以下步驟：通過對仙客來的柱頭可授性以及花粉生活力測定，得到準確采集花粉時間和授粉時期：母本在開花后4～5天柱頭可授性最強，花瓣由向上聚攏至剛剛展開，花藥及其花柱朝下生長，花瓣及萼片朝上生長，花粉呈純黃色父本同樣在開花4～5天時花粉生活力較強。采集開花4～5天的父本花粉，授于開花4～5天的母本柱頭上，5個月后果實成熟，采摘果實并收集種子保存。本發明通過花朵開放狀態準確判斷花粉最佳采集時期以及柱頭最佳可授時期確定最佳授粉時間，同時優化去雄手法，提高授粉成功率并縮減授粉次數，大大提高了仙客來人工授粉的效率，為加快仙客來種質資源創新和新品種選育奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及雜交育種領域，尤其涉及一種仙客來雜交育種方法。

背景技術

仙客來別名蘿卜海棠、兔耳花、兔子花、一品冠、篝火花、翻瓣蓮，是報春花科仙客來屬多年生草本植物。20世紀中期以后，在我國發展迅猛，在栽培、育種、繁殖、病蟲害防治等方面都有很大程度上的進步。仙客來作為十大盆花之一，花期長達5個月，適逢圣誕節、元旦、春節等節日，市場需求量巨大。目前我國大多數仙客來花卉企業主要依靠購買荷蘭、日本等國家的進口種子進行種植，成本較高，因此提高仙客來人工授粉效率對于仙客來新品種選育和制種具有重要的意義。仙客來花朵從未展開狀態(完全聚攏)到完全展開狀態(花瓣由聚攏到向上翻卷至完全展開，花藥及其花柱朝下生長，花瓣及萼片朝上生長)的時期較長，不易準確判斷其授粉時間，需要多次授粉，效率較低。準確判斷母本最佳授粉時間、父本花粉最佳采集時間是提高仙客來人工授粉效率的重要途徑之一。

發明內容

鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供的一種仙客來雜交育種方法，其包括以下步驟：

A、花粉采集：采集‘猩紅’、‘紅眼黃’仙客來開花0天(花瓣完全聚攏)、開花4～5天(花瓣由向上聚攏至剛剛展開，花藥及其花柱朝下生長，花瓣及萼片朝上生長，花粉呈純黃色)、開花9～10天(花瓣由聚攏到向上翻卷至完全展開，花藥及其花柱朝下生長，花瓣及萼片朝上生長，存在部分白色花粉)3種不同開花狀態的花朵，將花朵在密閉、干燥的條件下放置一天，摘除花瓣，將花粉彈落在硫酸紙上，采集到的花粉用于花粉生活力測定；

B、花粉生活力測定：采用離體萌發法和TTC染色法對‘猩紅’、‘紅眼黃’仙客來不同開花狀態的花粉進行花粉生活力測定。將制備好的培養基趁熱滴1～2滴于擦拭干凈的凹面載玻片上；培養基包括5％的硼酸，10％的蔗糖，1％的瓊脂，待冷卻后，用解剖針蘸取少量花粉均勻灑在培養基上，蓋上蓋玻片，將載玻片放入鋪有濕潤濾紙的培養皿中，移入25℃之黑暗條件的培養箱中進行培養。在2h、4h、6h、8h時分別取出載玻片，放在10×10倍顯微鏡下觀察，對每個載玻片隨機選取5個視野統計花粉萌發數，以花粉管伸出超過花粉粒直徑時為發芽標準，計算花粉萌發率；在凹面載玻片上，滴1～2滴0.5％TTC染色液，用解剖針將花粉均勻散落在染色液中，攪拌均勻，蓋上蓋玻片，置于35℃培養箱中進行暗培養，15min后在10×10倍顯微鏡下觀察拍照，每個品種3～4個凹槽，每個凹槽觀察不少于6個視野，在顯微鏡下觀察花粉著色情況，選擇清晰的、花粉排列均勻的視野進行拍照，統計并計算花粉的染色率；

萌發率(％)＝(花粉萌發個數/觀察花粉總數)×100％

染色率(％)＝(紅色花粉數+淡紅色花粉數)/觀察花粉總數×100％