[發明專利]鱉甲中提取的血管緊張素轉換酶抑制肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201810125564.6
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108358994B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 廖丹葵;廖彭瑩;孫麗霞;周利琴;孫建華;劉彭如;蘭雄雕;馮學珍
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C07K5/11
• 分類號: C07K5/11;C07K7/06;C12P21/06;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/20;C07K1/36;A61K38/07;A61K38/08;A61P1/16;A61P9/12
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發明公開了從鱉甲中提取的血管緊張素轉換酶抑制肽及其制備方法，包括兩種活性肽，其中一種活性肽的氨基酸序列為Lys?Arg?Glu?Arg，另一種活性肽的氨基酸序列為Leu?His?Met?Phe?Lys；本發明以鱉甲為原料用水提取獲得反應原料液，經酶解處理、微濾及超濾后，以凝膠層析柱和陰離子交換層析柱分離得到抑制肽原料，再對抑制肽原料進行多次色譜法分離純化，獲得血管緊張素轉換酶抑制肽。本發明原料儲量大、價格低，制備工藝合理、可操作性強，獲得的血管緊張素轉換酶抑制肽活性好。

技術領域

本發明屬于功能食品領域，具體涉及鱉甲中提取的血管緊張素轉換酶抑制肽及其制備方法。

背景技術

血管緊張素轉換酶(Angiotensin converting enzyme，ACE)為含鋅離子的二肽水解酶，其主要生物學功能是切除血管緊張素I(Angiotensin I，AngI)的羧基端二肽生成血管緊張素II(Angiotensin II，AngII)，從而激發一系列生理反應，同時使舒緩激肽失活，對血液循環造成的直接影響是使血壓升高。血管緊張素轉換酶抑制劑(Angiotensinconverting enzyme inhibitor，ACEI)會對ACE產生抑制活性從而可用于治療高血壓。

在肝臟等多種組織器官中存在局部腎素-血管緊張素-醛固酮系統(Renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)，RAAS已被證實是肝纖維化發展過程中的重要環節之一。ACEI在局部RAAS系統中能夠通過影響相關成分對肝纖維化產生抑制效果，已證實賴諾普利(lisinopril)、培哚普利(perindopril)、卡托普利(captopril)、依那普利(enalapril)和福辛普利(fosinopril)均會對RAAS系統及其相關通路產生不同影響，從而表現出對大鼠肝纖維化模型的抑制作用。

血管緊張素轉換酶抑制肽(ACEIP)是ACEI的重要組成，其來源廣泛，近幾十年來人們已經從動物血液、雞蛋、乳類、肉類、魚類、大豆、玉米、小麥等常見食用性蛋白中篩分出上百種ACEIP。酶法制備已經成為獲取ACEIP的主要方法，該法具有安全性高、條件溫和、易于控制、容易實現工業化生產、成本低等優勢，因而是工業化生產活性肽的主要技術。天然蛋白質肽鏈內部通常存在功能區，通過蛋白酶的水解可將其中隱藏的活性肽釋放出來，從而發揮出生理功能。

鱉甲為鱉科動物中華鱉(Trionyx sinensis)和山瑞鱉(T.steindachneri)的背甲，中華人民共和國衛生部將其列入可用于保健食品的物品名單，其主要功效是治療慢性肝纖維化、肝硬化、肝癌等癥。鱉甲的肽類成分是主要活性物質，已經從鱉甲中分離鑒定的活性肽類成分包括，從抗肝纖維化活性組分中鑒定的NDDY、HGRFG、NPNPT、WLYPGNTSC和YSGAW，對急性肝損傷小鼠有治療效果的GAGPHGG。鱉甲煎口服液被證實能夠通過影響RAAS系統的主要成分延緩肝纖維化的發生與發展，篩選分離鱉甲中的ACEIP，可能也會對肝內RAAS系統產生影響，進而對肝纖維化的發生發展產生抑制。目前鮮有以鱉甲為原料制備ACEIP的報道。

發明內容

本發明提供以鱉甲為原料提取的血管緊張素轉換酶抑制肽Lys-Arg-Glu-Arg和Leu-His-Met-Phe-Lys及其制備方法，本發明用木瓜蛋白酶酶解鱉甲提取液，再將提取液微濾及超濾后得到超濾液，再多次使用色譜法從超濾液中提取制備得到Lys-Arg-Glu-Arg和Leu-His-Met-Phe-Lys這兩種血管緊張素轉換酶抑制肽，為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

鱉甲中提取的血管緊張素轉換酶抑制肽，包括兩種活性肽，其中一種活性肽的氨基酸序列為Lys-Arg-Glu-Arg，另一種活性肽的氨基酸序列為Leu-His-Met-Phe-Lys。

鱉甲中提取的血管緊張素轉換酶抑制肽的制備方法，包括如下步驟：