[發明專利]一種癲癇易感基因篩查試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 201810123563.8
• 申請日: 2018-02-07
• 公開（公告）號: CN108300782A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 歐陽秦;操立超;鄶斌;毛燕;陳娟;李潔璇;黃業勝
• 申請（專利權）人: 深圳市一道生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 合肥中博知信知識產權代理有限公司 34142
• 代理人: 張加寬

1.一種癲癇易感基因篩查試劑盒，其特征在于：包括用于對待測樣品目標區域進行擴增的癲癇易感基因的特異性引物和所檢測的基因位點RS號。

2.根據權利要求1所述的癲癇易感基因篩查試劑盒，其特征在于，所述特異性引物的堿基序列如下：

SEQ ID NO:1F:AGATATTTTCCTTCCCCACATGGAAGGCTA

SEQ ID NO:2R:AGGAGGCTGGAGTTGAGTATTTCCCTTTCC

SEQ ID NO:3F:AATTTATAAAGGAAAGATGCTGGCCAGGCA

SEQ ID NO:4R:GGTGGCTCACACCTGTAATCCCAGCACTTT

SEQ ID NO:5F:TTTAGTTGTTCAGAATAGGCAATGCTGGCC

SEQ ID NO:6R:ATAAGGAGAAATGCTGGAAGAAGAGATAGA

SEQ ID NO:7R:GAGTGGTATTCTCAGAACTGCCAGAAAAAT

SEQ ID NO:8R:TTGTCATAGATTGTGTAGATCTGTCTATGG

SEQ ID NO:9F:CTTAAGTTTGCTTTCAGTCTGTCATGTGAA

SEQ ID NO:10R:TCAGTCATTCTCACTATATTCCTTTTGTGG；

其中，SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的檢測基因位點RS號為rs10030601，SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的檢測基因位點RS號為rs111577701，SEQ IDNO:5和SEQ ID NO:6的檢測基因位點RS號為rs12059546，SEQ ID NO:7和SEQID NO:8的檢測基因位點RS號為rs10496964，SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10的檢測基因位點RS號為rs11890028。

3.一種如權利要求2所述的癲癇易感基因篩查試劑盒的使用方法，其特征在于：包括檢測體系和檢測方法。

4.根據權利要求3所述的癲癇易感基因篩查試劑盒的使用方法，其特征在于，所述檢測體系如下：

5.根據權利要求3所述的癲癇易感基因篩查試劑盒的使用方法，其特征在于，所述檢測方法步驟為：

1)使用“康為世紀口腔拭子基因組DNA提取試劑盒”提取待測樣本的基因組DNA；

2)采用特異性引物和檢測體系進行熒光定量PCR反應來檢測基因位點的基因型；

3)使用Roche Light Cycler 480Ⅱ實時熒光定量PCR儀進行擴增。

6.根據權利要求5所述的癲癇易感基因篩查試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟3)中擴增程序為：95℃預變性10min；然后按95℃變性10s，65℃退火10s，72℃延伸30s的程序進行20個循環，每完成一次循環退火溫度降低0.5℃，直至55℃，停止降溫，之后再進行25個循環；擴增產物的熔解步驟在PCR循環結束后立即進行，程序為：升溫至95℃1min，然后降溫至40℃1min，再升溫至65℃1s，從65℃連續升溫到95℃的過程中以25次/℃的方式進行熒光收集，最后降溫至40℃。