[發(fā)明專利]從鳀魚皮中提取活性多肽方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810111437.0
• 申請(qǐng)日: 2018-02-05
• 公開（公告）號(hào): CN108179163A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李健
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘭溪市哥特生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

本發(fā)明公開一種從鳀魚皮中提取活性多肽方法，具體步驟如下：1）取新鮮鳀魚，取鳀魚皮洗凈，勻漿，于?20℃至?30℃冷藏備用；2）解凍并將勻漿后的鳀魚皮按固液比4?6:1加入去離子水，于42?50℃條件下恒溫?cái)嚢瑁{(diào)pH值，加入酶制劑，酶解4?6h，酶解過程中在酶解液中通入氮?dú)猓?）將酶解液進(jìn)行滅酶處理，調(diào)pH至中性，離心，取上清液，得鳀魚活性多肽，本發(fā)明對(duì)鳀魚多肽的提取率高且多肽中的芳香性氨基酸含量高，提取的多肽對(duì)自由基清除率很高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物多肽提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從鳀魚皮中提取活性多肽方法。

背景技術(shù)

鳀魚是一種生活在溫帶海洋中上層的小型魚類，是其它經(jīng)濟(jì)魚類的餌料生物。溫水性中上層魚類，趨光性較強(qiáng)，幼魚更為明顯。小型魚，產(chǎn)卵魚群體長為75~140毫米，體重5~20克。海鯅即為幼鳀魚加工的咸干品，但是鳀魚營養(yǎng)價(jià)值極高，富含蛋白質(zhì)，含有人體必需的8種氨基酸，特別是其中的脯氨酸、亮氨酸及芳香性氨基酸的肽具有自由基清除能力。

我國鳀魚資源豐富，僅黃海、東海鳀魚的現(xiàn)有資源量約300萬噸左右，由于鳀魚性成熟早，生殖周期短，生殖率高，繁殖周期短，年捕撈量超50-70萬噸，目前，鳀魚除了提煉魚油，鳀魚常作為鮮活餌料或加工成飼料魚粉，加工利用率低，對(duì)水體污染嚴(yán)重，對(duì)于鳀魚下腳料的利用還有待開發(fā)。

現(xiàn)有技術(shù)提供了多種鳀魚活性多肽提取方法，例如中國發(fā)明授權(quán)專利文獻(xiàn)，授權(quán)公告號(hào)：CN 103937864 B，本發(fā)明的目的是提供一種從鳀魚發(fā)酵液中分離的活性多肽，本發(fā)明得到的抗神經(jīng)細(xì)胞損傷多肽分子量為 2,181Da ；由天門冬氨酸、蘇氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、賴氨酸和精氨酸等十一種氨基酸組成，是一種新型的具有活性的多肽。本發(fā)明獲得的多肽在谷氨酸鹽對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷模型中，本發(fā)明的活性多肽的加入可以顯著提高 PC12 神經(jīng)細(xì)胞的存活率，在終濃度為 50μg/mL 時(shí)，細(xì)胞存活率與損傷組比較提高了 26.4％，有效地減輕了谷氨酸鹽誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷。另外，對(duì)其神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的細(xì)胞機(jī)理研究發(fā)現(xiàn)，活性多肽的加入顯著增加了胞內(nèi)的總抗氧化能力，且對(duì) SOD 活力的增加有一定促進(jìn)作用，但是該方法操作略顯復(fù)雜，在活性多肽得率上還有待提高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種多肽提取率高且多肽中的芳香性氨基酸含量高，提取的多肽對(duì)自由基清除率高的一種從鳀魚皮中提取活性多肽方法。

本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為：從鳀魚皮中提取活性多肽方法，具體步驟如下：

1）取新鮮鳀魚，取鳀魚皮洗凈，勻漿，于-20℃至-30℃冷藏備用；

2）解凍并將勻漿后的鳀魚皮按固液比4-6:1加入去離子水，于42-50℃條件下恒溫?cái)嚢瑁{(diào)pH值，加入酶制劑，酶解4-6h，酶解過程中在酶解液中通入氮?dú)猓?/p>

3）將酶解液進(jìn)行滅酶處理，調(diào)pH至中性，離心，取上清液，得鳀魚活性多肽，上述方法通過酶解法提取鳀魚活性多肽，反應(yīng)條件溫和、反應(yīng)效率高，不存在逆反應(yīng)，提取的鳀魚活性多肽分子量在2000-3000Da之間，由天門冬氨酸、蘇氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、賴氨酸和精氨酸等十一種氨基酸組成，具有很好的體外抗氧化能力，經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，提取的鳀魚活性多肽能有效提高血清及組織的 SOD 活性、GSH-Px 活性和T-AOC 值。

優(yōu)選的，步驟2中的去離子水中含有0.06-0.15wt%的L-苯基丁氨酸和D-苯基丁氨酸的混合體，L-苯基丁氨酸和D-苯基丁氨酸重量比為52~58:0.3~0.7，通過在去離子水中加入的混合體可使鳀魚細(xì)胞膜下形成小孔，致使細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)泄漏，提高活性多肽的得率，并且避免了破碎處理過程中需因升溫及機(jī)械力引起的蛋白質(zhì)變性。