[發明專利]一種分離提純蛋清溶菌酶的方法

在審

• 申請號: 201810106401.3
• 申請日: 2018-02-02
• 公開（公告）號: CN108118044A
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發明（設計）人: 劉冬梅;黃燕燕;周欽育;黃泳堯;林鐘培;林梓茵
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N9/36
• 分類號: C12N9/36
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 宮愛鵬

1.一種分離提純蛋清溶菌酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)蛋清預處理：將蛋清攪拌均勻后，過80～120目濾網得蛋清濾液；

(2)樹脂預處理：取樹脂用蒸餾水洗滌至無明顯雜質并濾干，先用鹽酸溶液浸泡后，再用蒸餾水沖洗得樹脂A；樹脂A在氫氧化鈉溶液浸泡后，用蒸餾水沖洗得樹脂B；其中，樹脂選自724大孔弱酸性陽離子交換樹脂、732型陽離子交換樹脂、D152大孔弱酸性陽離子交換樹脂中的一種；

(3)吸附：往蛋清濾液中加入步驟(2)所得樹脂B，攪拌混勻后靜置吸附，棄去上清液，用蒸餾水洗滌，得樹脂L；

(4)洗脫：向步驟(3)所得樹脂L中加入NaCl溶液，攪拌洗脫，濾出洗脫液，重復洗脫合并所得洗脫液，保留濾出洗脫液后的樹脂；

(5)超濾：將步驟(4)所得洗脫液先置于截留量為50KD的超濾離心管中，離心并取下層液；后將下層液置于截留量為3KD的超濾離心管中，離心并取上層截留液，即得到所述溶菌酶。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中蛋清濾液與樹脂B的體積比為10：2～4，控制蛋清濾液pH值為6～10。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中蛋清濾液與樹脂B的體積比為10：2.4～2.5。

4.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于，步驟(3)中蛋清濾液pH值為9.0～9.5。

5.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于，步驟(4)中所述NaCl溶液的濃度為0.5～2.5mol/L，所述攪拌洗脫的頻率為60～100r/min，時間為20～100min。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(4)所述NaCl溶液為1～1.5moL/L，攪拌洗脫時間為60～80min，NaCl溶液的用量為步驟(1)所述蛋清濾液體積的0.5～1倍。

7.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于，步驟(5)中所述截留量為50KD離心管的轉速為4000～6000g，離心時間為5～15min；所述截留量為3KD離心管的轉速為6000～7000g，離心時間為50～70min。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟(5)所述截留量為50KD離心管的轉速為5000g，離心時間為10min；所述截留量為3KD離心管的轉速為6500g，離心時間為60min。

9.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述樹脂預處理，將樹脂浸泡于2～4倍樹脂體積的0.8～1.2mol/L鹽酸溶液，浸泡時間為10～12h，用蒸餾水沖洗至流出液pH值為5.5～6.5，得樹脂A；再將樹脂A浸泡于2～4倍樹脂體積的0.8～1.2mol/L氫氧化鈉溶液，浸泡時間為10～12h，用蒸餾水沖洗至流出液pH值為8.5～9.5，得樹脂B。

10.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于，步驟(4)所述濾出洗脫液后的樹脂作為樹脂A繼續進行步驟(2)制備樹脂B。