[發明專利]一種生產透皮肽寡肽-1融合蛋白的制備方法

在審

• 申請號: 201810104952.6
• 申請日: 2018-02-02
• 公開（公告）號: CN108285492A
• 公開（公告）日: 2018-07-17
• 發明（設計）人: 黃赫;薛濤;孫韻
• 申請（專利權）人: 煙臺康達爾藥業有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12P21/02;C07K1/16;C07K1/14
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 馬國冉

本發明涉及一種生產透皮肽寡肽?1融合蛋白的制備方法。步驟包括：工程菌發酵；擴張床吸附；凝膠分離；冷凍升華干燥。有益效果：本發明利用上述方法制得的透皮肽寡肽?1融合蛋白，具有發酵液中產物濃度高(大于500mg/L)，提取工藝簡單(只需要3步層析操作，較之前工藝簡化1倍)，操作成本低及純度高(98.37％以上)，可很好的實現工業化發酵生產工藝，經濟效益十分顯著。

技術領域

本發明涉及一種生產透皮肽寡肽-1融合蛋白的制備方法，屬于生物工程領域。

背景技術

EGF(Epidermal Growth Factoy)中文名稱為表皮生長因子，俗稱寡肽-1，由53個氨基酸組成(并包括3個二硫鍵的多肽)。Montalcini和Cohen教授因為發現寡肽-1并分析其結構和作用機理，獲1986年諾貝爾生理學及醫學獲獎。寡肽-1能刺激表皮細胞生長因子受體之酪氨酸磷酸化，達到修補增生的效果，從而以新生的細胞代替衰老和死亡的細胞。

最初的寡肽-1主要被應用于醫學領域，對治療燒燙傷、促進傷口愈合，修復腸胃道、肝臟及眼角膜的損傷等，功效十分顯著。

其后，更廣泛應用于化妝品領域，寡肽-1能夠深入肌膚基底層，加速細胞的增殖分化，讓衰老細胞快速角化，使已斷裂、變性的膠原纖維和彈性纖維得到修復，皮膚彈性增加，皺紋逐漸平復乃至消失，同時，可使面部的色斑逐漸淡化，使表皮內角質層水分保持能力增加，讓肌膚滋潤煥發活力。

透皮肽有十幾個氨基酸組成，可以穿透細胞膜。為進一步增加寡肽-1的透皮吸收性在其N端加透皮肽，可以大大增強肽-1的功效。

寡肽-1是極為安全的，因為它是一種人體本身就能夠產生的生物因子，在年輕的時候，人體自身能夠產生足夠多的寡肽-1，促使表皮細胞生長，但隨著年齡的減退，寡肽-1的產生量逐步下降，因此表皮細胞的更新速度就越來越慢了。正是寡肽-1為人體本身之組成部分，故沒有任何毒副作用，十分安全。使用寡肽-1護膚品，相比于一些其它的抗皺方法，安全更是卓越的優點。

盡管目前已有一些寡肽-1的基因工程生產方法，但這些方法均存在著發酵液中產物濃度低，提取工藝復雜，操作成本高及收率低等缺點，至今為止，尚未有一個成熟的工業化發酵生產工藝。因此，有必要提出有效的技術方案，解決上述問題。

發明內容

本發明針對上述現有技術的不足，提供一種方法簡單、收率高、周期短的生產透皮肽寡肽-1融合蛋白的制備方法。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：

一種生產透皮肽寡肽-1融合蛋白的制備方法，步驟包括：

(1)工程菌發酵；

(2)擴張床吸附；

(3)凝膠分離；

(4)冷凍升華干燥。

優選地，所述工程菌發酵為：

從菌種管中挑取單菌落接入種子培養基中，同時加入氨芐青霉素，使其在培養基中的濃度達到50-200mg/ml；28-32℃，150-250rpm搖床培養8-12小時，得到培養液；按1-8％接種量將所述培養液再次接入種子培養基中，同時加入氨芐青霉素，使其在50-200mg/ml，28-32℃，150-250rpm搖床培養8-12小時，再按1-8％接種量將活化的種子液加入到發酵培養基中，29-31℃，160-240rpm，PH值維持7.0，培養9-11小時，然后溫度誘導，繼續培養2-8小時，得到發酵液。

優選地，所述擴張床吸附為：

用冷凍離心機將所述發酵液于2-4℃條件下以6000-12000rpm的速度離心10-30min，棄上清液保留沉淀于2-4℃條件下保存備用；