[發(fā)明專利]一種敵百蟲(chóng)降解菌株的分離篩選方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810104531.3 | 申請(qǐng)日： | 2018-02-02 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN108060106A | 公開(kāi)（公告）日： | 2018-05-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 邢奕;姜博;張娜娜;路培;連路寧;陳亞婷 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 北京科技大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N1/20 | 分類號(hào)： | C12N1/20;C12N1/02;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京市廣友專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 11237 | 代理人： | 張仲波 |
| 地址： | 100083*** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 敵百蟲(chóng) 降解 菌株 分離 篩選 方法 | ||
本發(fā)明提供一種敵百蟲(chóng)降解菌株的分離篩選方法，該方法操作步驟包括1)土壤的采集；2)培養(yǎng)基的制備；3)梯度馴化法對(duì)敵百蟲(chóng)降解菌株富集馴化；4)敵百蟲(chóng)降解菌株的分離、鑒定；5)探究該菌株對(duì)敵百蟲(chóng)的降解特性，從而分析菌株對(duì)敵百蟲(chóng)污染土壤的生物修復(fù)潛力。本發(fā)明篩選出的菌株是在以敵百蟲(chóng)為唯一碳源的無(wú)機(jī)鹽固體培養(yǎng)基中分離得到，同時(shí)該方法可用于其他有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌的篩選；所得到的菌株為土壤本源微生物，是一種可降解敵百蟲(chóng)的新型菌種，可能應(yīng)用于敵百蟲(chóng)污染土壤的生物修復(fù)中；本發(fā)明采用氣相色譜?質(zhì)譜法測(cè)定菌株對(duì)敵百蟲(chóng)的降解效果，操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確度高。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種敵百蟲(chóng)降解菌株的篩選方法，屬于微生物降解農(nóng)藥殘留領(lǐng)域。
背景技術(shù)
敵百蟲(chóng)(trichlorfon，TCF)化學(xué)名稱為O,O-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羥基乙基)，分子式為C
由于敵百蟲(chóng)的長(zhǎng)期大量使用，蔬菜、糧食等農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留超標(biāo)問(wèn)題嚴(yán)重，不僅影響農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量，并且對(duì)人類健康造成潛在的危害。敵百蟲(chóng)可以通過(guò)食用食物、皮膚接觸和呼吸吸入等途徑進(jìn)入人體，抑制體內(nèi)膽堿酯酶的活性，造成體內(nèi)大量乙酰膽堿積累，使機(jī)體正常生理功能失調(diào)，危害人體健康。因此，解決土壤中敵百蟲(chóng)農(nóng)藥的殘留問(wèn)題已成為目前我國(guó)關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題之一。
針對(duì)敵百蟲(chóng)污染土壤的環(huán)境問(wèn)題，大量學(xué)者已經(jīng)利用物理、化學(xué)以及生物處理的方法展開(kāi)了研究，但是物理化學(xué)方法成本高，易產(chǎn)生二次污染，因此在治理敵百蟲(chóng)污染土壤問(wèn)題上受到限制。而微生物降解技術(shù)具有降解效率高、處理成本低、環(huán)境影響小等優(yōu)勢(shì)，已成為目前降解敵百蟲(chóng)的關(guān)鍵手段。目前已有一些關(guān)于敵百蟲(chóng)降解菌的研究報(bào)道，李榮從污染土壤中篩選出一株能以敵百蟲(chóng)為唯一碳源的微生物，初步鑒定屬于鞘氨醇單胞菌屬。余臣磊從土壤中篩選出一株能夠降解敵百蟲(chóng)的菌株為Streptomyces levis，屬于鏈霉菌屬。本發(fā)明以長(zhǎng)期受有機(jī)磷農(nóng)藥污染的農(nóng)田土壤為菌種來(lái)源，從中篩選能夠降解敵百蟲(chóng)的土著微生物，由于該微生物來(lái)源于土壤，對(duì)污染環(huán)境具有良好的適應(yīng)性和穩(wěn)定性，可以優(yōu)勢(shì)菌種的形式發(fā)揮降解作用，因此，本發(fā)明利用微生物降解技術(shù)對(duì)解決敵百蟲(chóng)污染土壤問(wèn)題具有良好的應(yīng)用價(jià)值。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)上述問(wèn)題，提供一種快速、高效的從污染土壤中分離得到敵百蟲(chóng)降解菌株的篩選方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種敵百蟲(chóng)降解菌株的分離篩選方法，所述步驟具體如下：
(1)降解菌株的富集培養(yǎng)：向100ml含敵百蟲(chóng)100ml/L的富集培養(yǎng)基中加入4g土壤，在25～30℃，180r/min下振蕩培養(yǎng)7天；以5～10％的接種量將上述混合液接種到新鮮培養(yǎng)基中，提高敵百蟲(chóng)濃度至200mg/L；之后每培養(yǎng)7后天轉(zhuǎn)接一次，其中敵百蟲(chóng)的濃度依次增加至300mg/L，400mg/L，500mg/L；
所述的土壤來(lái)源于長(zhǎng)期受敵百蟲(chóng)污染的農(nóng)田土壤，取土壤表層土(0～20cm)處鮮土樣，用無(wú)菌塑料袋分裝，帶回實(shí)驗(yàn)室于4℃環(huán)境下保存。
所述的富集培養(yǎng)基組成為：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，NaH
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