[發(fā)明專利]一種敵百蟲降解菌株的分離篩選方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810104531.3 | 申請(qǐng)日： | 2018-02-02 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN108060106A | 公開（公告）日： | 2018-05-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 邢奕;姜博;張娜娜;路培;連路寧;陳亞婷 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 北京科技大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N1/20 | 分類號(hào)： | C12N1/20;C12N1/02;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京市廣友專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 11237 | 代理人： | 張仲波 |
| 地址： | 100083*** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說(shuō)明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 敵百蟲 降解 菌株 分離 篩選 方法 | ||
1.一種敵百蟲降解菌株的分離篩選方法，其特征在于：
(1)降解菌株的富集培養(yǎng)：向100ml含敵百蟲100ml/L的富集培養(yǎng)基中加入4g土壤，在25～30℃，180r/min下振蕩培養(yǎng)7天；以5～10％的接種量將上述混合液接種到新鮮培養(yǎng)基中，提高敵百蟲濃度至200mg/L；之后每培養(yǎng)7后天轉(zhuǎn)接一次，其中敵百蟲的濃度依次增加至300mg/L，400mg/L，500mg/L；
(2)降解菌株的馴化培養(yǎng)：取步驟(1)中培養(yǎng)的最終菌液，以5～10％的接種量轉(zhuǎn)接到無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，添加敵百蟲濃度為500mg/L，25～30℃，180r/min下進(jìn)行馴化培養(yǎng)，培養(yǎng)7天后馴化結(jié)束；
(3)降解菌株的分離：將步驟(2)中馴化后的菌液，稀釋10
(4)降解菌株的純化：根據(jù)步驟(3)中生長(zhǎng)菌株的外觀形態(tài)，挑取菌落在含有敵百蟲的選擇性LB培養(yǎng)基固體平板上多次劃線分離純化菌株，28～35℃恒溫倒置培養(yǎng)3～5天，最終得到單菌落；
(5)降解菌株的保存：挑取步驟(4)中生長(zhǎng)的單菌落于-80℃冰箱中保存；
(6)菌株降解特性研究：將步驟(3)中單菌落在LB培養(yǎng)基中過(guò)夜培養(yǎng)制成種子液，然后接種10ml于100～150ml無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，其中以敵百蟲為唯一碳源，濃度為400～600mg/L，25～30℃，180r/min振蕩培養(yǎng)，每隔一天取樣測(cè)定其中敵百蟲含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的敵百蟲降解菌株的分離篩選方法，其特征在于：所述步驟1)中的土壤來(lái)源于長(zhǎng)期受敵百蟲污染的農(nóng)田土壤，取土壤表層土(0～20cm)處鮮土樣，用無(wú)菌塑料袋分裝，帶回實(shí)驗(yàn)室于4℃環(huán)境下保存。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的敵百蟲降解菌株的分離篩選方法，其特征在于：所述的富集培養(yǎng)基組成為：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，NaH
所述的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基組成為：KH
所述的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基固體平板組成為：KH
所述的LB培養(yǎng)基固體平板組成為：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 5g，敵百蟲為500mg，瓊脂15.0～20.0g，加蒸餾水至1000ml，調(diào)pH至中性；
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于北京科技大學(xué)，未經(jīng)北京科技大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購(gòu)買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請(qǐng)聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201810104531.3/1.html，轉(zhuǎn)載請(qǐng)聲明來(lái)源鉆瓜專利網(wǎng)。
