[發明專利]一種插拔式可實現信號二次放大的拉曼層析試紙

在審

• 申請號: 201810104302.1
• 申請日: 2018-02-02
• 公開（公告）號: CN110133254A
• 公開（公告）日: 2019-08-16
• 發明（設計）人: 王升啟;郄志偉;肖瑞
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N21/65
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種插拔式可實現信號二次放大的拉曼層析試紙。該檢測試紙分為A卡、B卡與C卡三部分，A、B卡之間通過卡口可以實現連接與斷開，C卡可直接置于B卡之上；A卡由底板1、樣品墊、結合墊1、結合墊2、結合墊3組成。B卡由反應膜、測定線(固定化通用性識別元件)、質控線、吸水紙墊、底板2組成。C卡由還原墊、增強墊組成；插拔式設計主要優勢在于同一B卡可與不同A卡組合使用，增強了信號可比性。兩種膠體金的聯用及反應膜上Ag的還原實現信號二次放大。本發明的試紙條操作簡單、檢測時間短、儲存簡單、保質期長。本發明可用于臨床診斷、檢驗檢疫、食品安全檢測、司法鑒定、毒品檢測等諸多領域，具有廣闊的市場前景。

技術領域

本發明涉及一種檢測試紙，具體涉及一種插拔式可實現信號二次放大的拉曼層析試紙，屬于生物醫學技術領域。

背景技術

基于ELISA檢測原理的免疫層析試紙以其測定時間短、操作簡便、結果判讀直觀的優勢，成為實踐中使用最為廣泛的層析技術。以常見的小分子免疫層析試紙為例，其檢測原理多是將待測物特異性抗體預先固定到硝酸纖維素膜的某一區帶，待測樣品滴加到試紙的一端，在毛細管作用下，樣品沿該膜向前移動，當經過固定有抗體的區域時，樣品中的待測抗原會與該抗體發生特異性結合。此時，若用免疫標記的納米顆粒如膠體金或免疫酶染色，或標記具有拉曼、上轉化發光、時間分辨熒光信號、化學發光的標記物分子，便可實現對待測物的定性定量檢測。

由于層析檢測法測定迅速、信號響應直觀、成本低廉，在醫療、食品、藥品、化學以及司法鑒定等多個領域已經得到廣泛應用，目前市場上存在一系列膠體金檢測試紙，但這些試紙均無通用性特征，且檢測靈敏度僅達到國標要求。

發明內容

本發明針對上述現有免疫層析產品的不足，建立一種插拔式可實現信號二次放大的拉曼層析試紙，目的是將免疫層析技術與拉曼檢測相結合，提高層析檢測的靈敏度與通用性。為了達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

插拔式二次信號放大拉曼層析試紙的結構和用途，該檢測試紙分為A卡、B卡與C卡三部分，A、B卡之間通過卡口可以實現連接與斷開，C卡可直接置于B卡之上；A卡由底板1、樣品墊、結合墊1、結合墊2、結合墊3組成。B卡由反應膜、測定線、質控線、吸水紙墊、底板2組成。C卡由還原墊、增強墊組成；插拔式設計主要優勢在于A卡與B卡(通用性設計，不因待測物的改變而改變該卡測定線與質控線的成份)之間可實現連接與斷開，在B卡不變的情況下，更換不同目標物的A卡。由于B卡可與不同A卡組合使用，增強了檢測指標間信號間可比性。信號二次放大主要通過兩種膠體金的聯用(一次信號放大)與反應膜上Ag的還原(第二次信號放大)實現，旨在提高靈敏度。

所述結合墊1含有偶聯了牛血清白蛋白抗體的拉曼標記金核銀殼；所述結合墊2含有偶聯了待測物抗體的拉曼標記金核銀殼；所述結合墊3含有待測物與生物素的偶聯物；反應膜上測定線與質控線，均呈與所述試紙的長相垂直的條帶狀，檢測區包被有親和素，質控區包被有重組G蛋白(SPG)，所述還原墊含有檸檬酸鈉緩沖液；所述增強墊含有硝酸銀溶液。

所述偶聯了牛血清白蛋白的拉曼標記金核銀殼通過活性酯法制備而成；所述拉曼標記金核銀殼通過種子誘導法制備。

所述偶聯了待測物抗體的拉曼標記金核銀殼通過活性酯法制備而成；所述拉曼標記金核銀殼通過種子誘導法制備。

所述待測物與生物素的偶聯物通過活性酯法制備而成。

所述底板為PVC或其它硬質不吸水材料；所述樣品吸收墊為吸濾紙；所述吸水紙墊為吸水紙。

本發明的另一個目的是提供一種制備上述膠體金試紙條的方法，其包括步驟：

1)制備具有包被親和素的檢測區和包被重組G蛋白的質控區的反應膜；制備C卡；

2)制備分別包被有牛血清白蛋白抗體的拉曼標記金核銀殼、偶聯了待測物抗體的拉曼標記金核銀殼以及待測物與生物素偶聯物的結合墊；