[發明專利]一種快速提取檢測植物組織中牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸的方法

有效

• 申請號: 201810102633.1
• 申請日: 2018-02-01
• 公開（公告）號: CN108459097B
• 公開（公告）日: 2019-11-26
• 發明（設計）人: 韓彬
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/89;G01N30/72
• 代理公司: 11245 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢;吳愛琴<國際申請>=<國際公布>=

1.一種提取植物組織中GGPP的方法，包括下述步驟：

1)用三元混合溶劑體系對植物組織進行提取，得到提取混合物；

2)對提取混合物進行離心處理，取上清液；

3)對上清液進行色譜分離，得到目標物GGPP；

步驟1)中，所述三元混合溶劑體系為環己醇、甲醇、氨水的三元混合體系，其中，氨水的質量濃度為28.0-30.0％；環己醇與甲醇、氨水的體積比依次為7-14：8：3-6；

所述三元混合溶劑體系的混合順序依次為甲醇、環己醇和氨水；

所述色譜分離采用2.1mm×100mm的Agilent ZORBAX Eclipse plus C18 RRHD 1.8μm反相柱，pH耐受范圍為2.0-9.0；

所述色譜分離中采用二元流動相：A，1mM甲酸銨水溶液；B，乙腈/異丙醇，9:1，v/v；

所述色譜分離采用梯度洗脫；

其中，B％為運行過程中流動相B所占(A+B)體積總和的比例。

2.一種檢測植物組織中GGPP的方法，包括下述步驟：

1)用三元混合溶劑體系對植物組織進行提取，得到提取混合物；

2)對提取混合物進行離心處理，取上清液；

3)對上清液進行色譜分離并對分離得到的化合物進行質譜檢測；

步驟1)中，所述三元混合溶劑體系為環己醇、甲醇、氨水的三元混合體系，其中，氨水的質量濃度為28.0-30.0％；環己醇與甲醇、氨水的體積比依次為7-14：8：3-6；

所述三元混合溶劑體系的混合順序依次為甲醇、環己醇和氨水；

所述色譜分離采用2.1mm×100mm的Agilent ZORBAX Eclipse plus C18 RRHD 1.8μm反相柱，pH耐受范圍為2.0-9.0；

所述色譜分離中采用二元流動相：A，1mM甲酸銨水溶液；B，乙腈/異丙醇，9:1，v/v；

所述色譜分離采用梯度洗脫；

其中，B％為運行過程中流動相B所占(A+B)體積總和的比例。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法步驟1)中，所述植物組織為：任何植物的根、莖、葉、花、果實、種子。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述植物組織為：丹參毛狀根。

5.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法步驟1)中，所述提取中，三元混合溶劑體系與植物組織的配比為400-450μL：17.5-22.5mg；

所述提取為快速浸提；

所述提取的時間為1-3min。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：步驟1)中在對植物組織進行提取前，還包括對植物組織進行預處理的操作；

所述預處理的操作為：將植物組織干燥成干燥樣品，再將干燥樣品粉碎，得到植物組織干粉。

7.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法步驟2)中，所述離心的條件為：12000-12700rpm/min離心10-30分鐘。

8.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：步驟3)中，所述流動相的流速為0.2-0.4mL，柱溫控制在25-40℃，進樣量為1-20μL。

9.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述質譜檢測采用Agilent高分辨質譜Q-TOF 6540進行檢測，fragmentor電壓為120-135V。