[發明專利]一種胎盤間充質干細胞的制備方法在審
| 申請號： | 201810095432.3 | 申請日： | 2018-01-31 |
| 公開（公告）號： | CN108103009A | 公開（公告）日： | 2018-06-01 |
| 發明（設計）人： | 高莉;袁衛平;汪曉敏;周麗英;萬謙 | 申請（專利權）人： | 溯源生命科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/073 | 分類號： | C12N5/073;C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 陳娟 |
| 地址： | 100000 北京市海淀*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 培養液 胎盤間充質干細胞 半量換液 組織塊 制備 間充質干細胞 制備技術領域 多能干細胞 細胞培養瓶 傳代培養 分化潛力 靜置培養 臨床應用 免疫原性 慶大霉素 生理鹽水 胎盤來源 細胞生長 增殖能力 干細胞 培養瓶 胎盤 倒扣 凍存 放入 剪取 盤狀 平皿 肉泥 正置 晃動 去除 高處 清洗 取材 上層 細胞 收獲 觀察 覆蓋 | ||
1.一種胎盤間充質干細胞的制備方法，其特征在于：具體制備方法為：
步驟一、選取足月順產或剖宮產的盤狀胎盤，確保無胎糞等污染，剪取胎盤底蛻膜面的組織，將底蛻膜面的細胞即靠近母體面的表層減去，減去之后挑顏色鮮紅的組織剪取；
步驟二、將剪取的組織塊在含有慶大霉素的生理鹽水中清洗至鮮紅色，所述的生理鹽水的配制方法為：在500mL生理鹽水加入2支慶大霉素即可；
步驟三、挑取顏色鮮亮的組織，將組織放入10cm平皿中，傾斜平皿，使組織位于高處，剪成肉泥，注意無菌操作；
步驟四、將剪碎的組織用細胞刮刀平鋪于T75cm
步驟五、將細胞培養瓶倒扣，且細胞培養瓶為設置有通氣濾膜的培養瓶，其中有組織塊的血培養面位于上方，緩慢加入6mL無血清培養基，培養基位于下方，
步驟六、將培養瓶正置，此時應確保培養液能覆蓋住每塊組織，靜置培養；
步驟七、三天后觀察組織塊，注意動作要輕，盡量不要晃動；
步驟八、七天后再半量換液，此后均半量換液；
步驟九、待細胞匯合度達到80％左右時，進行傳代培養；
步驟十、將培養液去除，用6mL生理鹽水沖洗一遍，加入2mL 0.25％Trypsin-EDTA，放入37℃培養箱中，約3-5min，待細胞變圓時，停止消化，吸取消化液到含有3ml培養基的離心管里，加入6mL
步驟十一、棄去上層溶液，收集細胞，加入傳代培養基，其中完全培養基
步驟十二、待細胞生長至80-90％密度時，收獲細胞，進行凍存。
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