[發明專利]一種基于長鏈分支環糊精合成葡萄糖基-β-環糊精的方法

在審

• 申請號: 201810092786.2
• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN108359698A
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 金征宇;柏玉香;吳云;夏柳溪;王金鵬;周星;趙建偉;田耀旗;焦愛權;謝正軍;徐學明
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P19/14
• 分類號: C12P19/14;C12P19/16;C12P19/48
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

1.一種基于長鏈分支環糊精合成葡萄糖基-β-環糊精的方法，其特征在于：

（1）長鏈分支環糊精的制備：由麥芽寡糖和β-環糊精為底物經普魯蘭酶作用逆向合成長鏈分支環糊精，再經層析柱分離去除未反應的β-環糊精；

（2）葡萄糖基-β-環糊精的制備：向步驟（1）制備所得長鏈分支環糊精中加入葡萄糖淀粉酶徹底水解得到葡萄糖基-β-環糊精和葡萄糖，再經層析柱分離去除葡萄糖，剩下的葡萄糖基-β-環糊精水溶液經冷凍干燥得到產品葡萄糖基-β-環糊精粉末。

2.如權利要求1所述基于長鏈分支環糊精合成葡萄糖基-β-環糊精的方法，其特征在于具體步驟如下：

（1）長鏈分支環糊精的制備：將麥芽寡糖和β-環糊精按照摩爾比8~12:1混合后作為底物，在其中按照100~500μL/mL底物的比例加入普魯蘭酶，反應溫度為50~60℃，反應體系為pH 4.5~5.5的乙酸-乙酸鈉緩沖液，反應時間為60~72h；

將所得反應液采用層析柱分離去除未反應的β-環糊精，層析填料的分離分子量范圍為100-1800MW；

（2）葡萄糖基-β-環糊精的制備：按照50~100μL/mL底物的量向步驟（1）所得反應液中添加葡萄糖淀粉酶，在50~55℃下水解12~20h；將所得水解后反應液經層析柱分離去除葡萄糖，層析填料的分離分子量范圍為100~1500MW；

將層析柱分離后所得葡萄糖基-β-環糊精水溶液在-10℃～-50℃下冷凍干燥48h，得到產品葡萄糖基-β-環糊精粉末。

3.根據權利要求2所述基于長鏈分支環糊精合成葡萄糖基-β-環糊精的方法，其特征在于：步驟（2）所述葡萄糖淀粉酶的酶活力為36~50U/mg。

4.根據權利要求2所述基于長鏈分支環糊精合成葡萄糖基-β-環糊精的方法，其特征在于：步驟（1）和步驟（2）的反應均在酶反應器中進行，轉速為500~1000rpm；步驟（1）及步驟（2）反應結束后，將酶反應器溫度升至100℃滅酶14~16min。

5.根據權利要求2所述基于長鏈分支環糊精合成葡萄糖基-β-環糊精的方法，其特征在于步驟（1）所述麥芽寡糖為麥芽四糖至麥芽七糖的混合物，其制備方法如下：

（1）稱取DE13-17麥芽糊精溶于超純水中，配置成質量/體積比為18%~22%的麥芽糊精水溶液；取該溶液上樣于凝膠層析柱，用含有0.1M碳酸氫銨的水溶液洗脫，自動收集器收集洗脫液，在收集40-50管后，停止收集；將收集的樣液進行TLC初步測定，在同一塊TLC板上依次點樣1μL，待樣點完全干透后，噴灑顯色液，放置于薄層色譜烤板機上緩慢升溫至160℃加熱顯色；

（2）選擇顯色的樣品管在畫好線的TLC板上重新點樣；其中標樣為100mM的G₁~G₇混合液，然后放于層析缸中，展開液不沒過點樣線，待展開至板子上邊緣后取出用吹風機吹干，噴灑顯色液，放置于薄層色譜烤板機上緩慢升溫至160℃加熱顯色，與含G₁~G₇的標樣對比后篩選出主要含有麥芽四糖G₄至麥芽七糖G₇的樣品管，進行冷凍干燥。

6.根據權利要求5所述基于長鏈分支環糊精合成葡萄糖基-β-環糊精的方法，其特征在于：所述顯色液為無水甲醇和水以體積比1:1混合，緩慢加入濃硫酸，使濃硫酸質量終濃度為10%；所述展開液為異丁醇:乙醇:水體積比5:5:3。