[發(fā)明專利]肉鴿致病菌沙門氏菌LAMP快速檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810090729.0
• 申請日: 2018-01-30
• 公開（公告）號: CN110093426A
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發(fā)明（設計）人: 李雪雁;陳永強;潘子強;沈志華;李正晟;許小飛
• 申請（專利權）人: 電子科技大學中山學院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/42
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種鴿中致病性沙門氏菌快速現場檢測的方法。所述的LAMP試劑盒，其特征是針對鴿中沙門氏菌設計致病性基因invA設計了2條LAMP外引物序列F3序列CGGCCCGATTTTCTCTGG和B3序列CGGCAATAGCGTCACCTT；2條內引物序列FIP序列GCGCAGCATCCGCATCAATAAT?ATGGTATGCCCGGTAAACAG和BIP序列GAACGGCGAAGCGTACTGGA?CATCGCACCGTCAAAGGAA。并且該LAMP試劑盒含外引物和內引物組成混合引物；dNTP；MgSO₄；BstDNA Polymerase Buffer；Bst DNA polymerase；Betaine；ddH₂O一支；染料一支。

技術領域

本技術針對肉鴿致病菌沙門氏菌invA基因設計的引物，發(fā)明了能夠現場快速檢測肉鴿致病菌沙門氏菌的LAMP試劑盒，效果好。

背景技術

沙門氏菌(Salmonella)病原體, 屬腸桿菌科, 沙門氏菌屬, 是一大群寄生于人和動物腸道中形態(tài)、培養(yǎng)特性、反應和抗原結構相似的革蘭氏陰性桿菌。沙門氏菌(Salmonella)的活動力和抗性都很強，是一種重要的人畜共患病，對畜禽養(yǎng)殖產生極大危害。對鴿子而言，威脅普遍且大，是一種極為頑固的病菌，一旦污染便不容易將其徹底根除，對肉鴿養(yǎng)殖業(yè)的危害性很大。據報道，沙門氏菌屬有2個種，分為42個群，2 500個血清型以上。而我國己報道的血清型有240種以上。不同物種感染的致病性沙門氏菌種類可能不一樣。

目前禽源性沙門氏菌的研究較多集中于雞源性沙門氏菌，發(fā)現引起禽類發(fā)病的沙門氏菌主要有雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌及其他有鞭毛能運動的多種沙門氏菌。但是目前對鴿源沙門氏菌的分子生物學研究非常有限，很少基于分子生物學的病原檢測和鑒定方法，而大多僅限于沙門氏菌的臨床鑒定和治療。這與近年來肉鴿養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴大而不符合，造成對鴿沙門氏菌感染的誤診，易帶來重大的損失。

LAMP技術是近幾年來發(fā)展起來的一項分子生物學檢測技術，相對于普通PCR和定量PCR等分子生物學檢測方法，LAMP技術有許多明顯的優(yōu)點：恒溫擴增，擴增階段對儀器的要求低；視覺直觀檢測，不需要檢測儀；反應速度快，敏感性高；用多個引物，特異性好；價格便宜。因此，LAMP擴增技術是一種新興的核酸擴增方法，具有快速、簡單、特異性強等特點。目前，LAMP技術已被應用在臨床病原微生物檢測、傳染病監(jiān)測領域等領域逐漸顯示出巨大的應用潛力并正得到了日益廣泛的運用。

近年來一些科技文獻公開了一些沙門氏菌的LAMP檢測方法，如：

中國專利<申請?zhí)?gt;CN201310268305.6<發(fā)明名稱>一種沙門氏菌LAMP引物組和試劑盒及檢測方法<申請人>石磊;李艷莉;王珊珊;趙一鳴;張志剛;蘇永裕;孟赫誠;閆鶴<聯(lián)系地址>510640 廣東省廣州市天河區(qū)五山路381號<摘要>本發(fā)明公開了一種沙門氏菌LAMP引物組和試劑盒及檢測方法，屬于食品安全的分子生物學檢測方法領域。本發(fā)明設計的一種沙門氏菌LAMP引物組包含檢測引物組及內標引物組；檢測試劑盒沙門氏菌LAMP引物組、DNA聚合酶、LAMP反應液、熒光核酸染料、內標、陽性對照和陰性對照。其檢測方法是通過提取待檢樣品，在63～65℃對樣品模板進行30～45min的擴增，不僅可檢測待檢樣品是否含有沙門氏菌，同時可根據檢測內標引物組是否有擴增來判斷是否有假陰性檢測結果。本發(fā)明具有快速高效、操作簡便、高特異性、高靈敏度、適合現場檢測等優(yōu)點，并且可有效防止假陰性的發(fā)生，適于推廣應用。