[發明專利]一種用于檢測血清中精氨酰琥珀酸裂解酶的試劑及其制備方法

在審

• 申請號: 201810085292.1
• 申請日: 2018-01-29
• 公開（公告）號: CN108318687A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 溫云飛;王成林;黃冬琴
• 申請（專利權）人: 青島浩鉑生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

本發明屬于精氨酰琥珀酸酶檢測技術領域，公開了一種用于檢測血清中精氨酰琥珀酸裂解酶的試劑及其制備方法，由R1和R2組成；R1由緩沖液、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、延胡索酸酶、蘋果酸脫氫酶、酶保護劑、防腐劑、表面活性劑和乙二胺四乙酸組成；R2由緩沖液、精氨酸代琥珀酸二鈉鹽、乙二胺四乙酸和硫酸肼組成。加入樣本10ul，加入R1，200ul，混勻，37℃孵育2?3min；加入R2，50ul，混勻，37℃孵育1min后，連續測定3min內的吸光度，計算吸光度變化率。本發明通過檢測ASAL催化精氨琥珀酸生成的另一種產品延胡索酸酶，利用NAD+在340nm處有吸收峰的特性，通過全自動生化儀檢測ASAL的量。

技術領域

本發明屬于精氨酰琥珀酸酶檢測技術領域，尤其涉及一種用于檢測血清中精氨酰琥珀酸裂解酶的試劑及其制備方法。

背景技術

精氨酰琥珀酸酶(ASAL)又稱精氨酰琥珀酸裂解酶，是肝臟尿素循環的重要酶系之一，催化精氨琥珀酸生成精氨酸和延胡索酸。ASAL主要表達于人的肝臟、腎臟及紅細胞中。盡管ASAL在腎臟中有表達，但血清ASAL活性在腎臟患者中不增高，而肝炎患者則明顯增高。傳統的檢測慢性肝病最主要的兩個指標為丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)，但是根據俸家富等發表的文獻報道，丙氨酸氨基轉移酶(ALT)診斷慢性肝病的敏感性為97.6％，特異性為24.7％；天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)診斷慢性肝病的敏感性為83.8％，特異性僅為28.3％；而ASAL對判斷慢性肝病的敏感性為100.0％，特異性為91.1％；因此，ASAL有望成為敏感且特異的肝炎標志物。在檢測血清ASAL活性的探索中，主要以測定ASA L催化精氨琥珀酸生成精氨酸為基礎。然而，血清中含有較高濃度的精氨酸，加上所用方法操作繁瑣，試劑不夠穩定，因而沒有進入臨床使用。

綜上所述，現有技術存在的問題是：由于檢測標記物本身的缺陷，ALT、 AST對于慢性肝病的檢測存在特異性較差的問題，而雖然ASAL的特異性較高，但是由于方法學的問題，ASAL一直沒辦法準確的檢測。本發明提供了一種準確檢測血清中ASAL的試劑及其制備方法。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種用于檢測血清中精氨酰琥珀酸裂解酶的試劑及其制備方法。

本發明是這樣實現的，一種用于檢測血清中精氨酰琥珀酸裂解酶的試劑，所述用于檢測血清中精氨酰琥珀酸裂解酶的試劑由R1和R2組成，R1與R2的比值為4:1；

R1：pH7.0，由緩沖液50-200mmol/L、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸0.2-0.5mmol/L、延胡索酸酶2-10KU/L、蘋果酸脫氫酶2-10KU/L、酶保護劑1g/L、防腐劑1g/L、表面活性劑1g/L和乙二胺四乙酸1g/L組成；

R2：pH9.0，由緩沖液50-200mmol/L、精氨酸代琥珀酸二鈉鹽0.1-2mmol/L、乙二胺四乙酸1g/L和硫酸肼0.05-0.5mol/L組成。

進一步，所述R1中的緩沖液為磷酸鹽緩沖液、tris-HCl緩沖液中的一種或幾種；酶保護劑為牛血清白蛋白、乙二醇、葡聚糖的一種或者幾種；防腐劑為疊氮鈉表面活性劑為直鏈烷基苯磺酸鈉、壬基酚聚氧乙烯醚中的一種。

進一步，所述R2中緩沖液為硼砂緩沖液、甘氨酸緩沖液、CHES緩沖液的一種。

進一步，所述用于檢測血清中精氨酰琥珀酸裂解酶的試劑的反應原理為：

本發明的另一目的在于提供一種所述用于檢測血清中精氨酰琥珀酸裂解酶的試劑的制備方法，所述用于檢測血清中精氨酰琥珀酸裂解酶的試劑的制備方法包括以下步驟：

步驟一，加入樣本10ul，加入R1，200ul，混勻，37℃孵育2-3min；