[發(fā)明專利]一種蛋白質(zhì)Dhw1及其編碼基因dhw1和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810079409.5
• 申請(qǐng)日: 2018-01-26
• 公開（公告）號(hào): CN107987134B
• 公開（公告）日: 2018-08-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁宏偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海國禮生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/00
• 分類號(hào): C07K14/00;C12N15/11;C12N15/70;A01N43/50;A01P21/00
• 代理公司: 上海諾衣知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31298
• 代理人: 衣然

本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)領(lǐng)域，尤其涉及一種蛋白質(zhì)Dhw1及其編碼基因dhw1和應(yīng)用。所述蛋白質(zhì)Dhw1的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。所述基因dhw1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。通過人工合成基因dhw1并構(gòu)建質(zhì)粒載體后，轉(zhuǎn)化入工程菌株中表達(dá)，將其表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)Dhw1應(yīng)用于農(nóng)業(yè)領(lǐng)域。蛋白質(zhì)Dhw1能夠提高農(nóng)作物的免疫力，調(diào)節(jié)農(nóng)作物的生長，提高其抗病、抗蟲、抗旱和抗寒性能力，從而實(shí)現(xiàn)了農(nóng)作物的增產(chǎn)。該方法簡單成本低，且對(duì)土壤環(huán)境無污染，綠色環(huán)保。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)領(lǐng)域，尤其涉及一種蛋白質(zhì)Dhw1及其編碼基因dhw1和應(yīng)用。

背景技術(shù)

基因合成是指在體外人工合成雙鏈DNA分子的技術(shù)，基因合成是用人工方法合成基因的技術(shù)，是基因獲取的手段之一，相對(duì)于從已有生物中獲取基因來說，基因合成無需模板，因而不受基因來源限制。

人類首條人工合成的基因出現(xiàn)在上世紀(jì)60年代，2008年，J.C.Venter小組合成了Mycoplasma genitalium生殖道支原體基因組，另外美國約翰霍普金斯醫(yī)學(xué)院等處的研究人員也首次合成了一種真核生物基因。該方法可以獲得自然界中不存在的基因，為人類改造生物開辟了一個(gè)全新的方向，在可預(yù)計(jì)的將來，基因合成將在生命科學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮巨大作用，在新能源、新材料、人工生命、核酸疫苗、生物醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)技術(shù)等領(lǐng)域的作用已初步體現(xiàn)。

農(nóng)業(yè)是國民經(jīng)濟(jì)的基礎(chǔ)，大力發(fā)展農(nóng)業(yè)，促進(jìn)農(nóng)作物增產(chǎn)增收是各國科學(xué)家致力攻克的問題。由于中國人口眾多，農(nóng)作物供應(yīng)嚴(yán)重緊缺，而現(xiàn)有技術(shù)中存在的農(nóng)作物促進(jìn)生長劑存在效果不明顯、不環(huán)保、很容易對(duì)生態(tài)造成污染等問題。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述存在的問題，本發(fā)明第一個(gè)方面公開了一種蛋白質(zhì)Dhw1，所述蛋白質(zhì)Dhw1的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，該蛋白質(zhì)的分子量為38.26kDa。

本發(fā)明第二個(gè)方面公開了一種編碼上述蛋白質(zhì)Dhw1的基因dhw1，所述基因dhw1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。該基因?yàn)槿斯ぴO(shè)計(jì)基因，其序列在NCBI(美國國立生物技術(shù)信息中心)未能搜索出相關(guān)的序列，將其合成，并構(gòu)建質(zhì)粒載體后，轉(zhuǎn)化入工程菌株中表達(dá)，將其表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)Dhw1應(yīng)用在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域。

本發(fā)明第三個(gè)方面公開了上述蛋白質(zhì)Dhw1在促進(jìn)農(nóng)作物生長中的應(yīng)用，所述農(nóng)作物為小麥、塔菜等。簡單來講，其噴施蛋白質(zhì)Dhw1于農(nóng)作物的葉面上時(shí)，該蛋白質(zhì)與農(nóng)作物表面細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，引起農(nóng)作物體內(nèi)一系列相關(guān)酶活性的增強(qiáng)，以調(diào)節(jié)水楊酸含量為主要路徑，釋放抗性因子，激活農(nóng)作物抗性系統(tǒng)，并產(chǎn)生具有抗病作用的幾丁酶、葡聚糖酶、植保素及PR蛋白等因子，從而提高了農(nóng)作物的免疫力，調(diào)節(jié)了農(nóng)作物生長，提高其抗病、抗蟲、抗旱和抗寒性能力，從而實(shí)現(xiàn)了農(nóng)作物的增產(chǎn)。

本發(fā)明第四個(gè)方面公開了一種生產(chǎn)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)Dhw1的方法，包括以下步驟：

S1、人工合成上述基因dhw1；

S2、得到轉(zhuǎn)化有S1中基因dhw1的工程菌種；

S3、將S2中的工程菌種經(jīng)培養(yǎng)后收集菌體發(fā)酵液；

S4、將S3中的菌體發(fā)酵液進(jìn)行分離純化得到蛋白質(zhì)Dhw1。

優(yōu)選的，所述S1包括以下步驟：

S11：分別進(jìn)行基因dhw1的單鏈oligo的設(shè)計(jì)與合成；

S12：利用PCR方法將S11中的單鏈oligo拼接成雙鏈DNA，即得到基因dhw1。

優(yōu)選的，所述S2包括以下步驟：

S21：將基因dhw1克隆到pET28a載體得到dhw1-pET28a載體；