[發(fā)明專利]一種多肽、多肽-siRNA誘導(dǎo)共組裝體及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810078986.2
• 申請日: 2018-01-26
• 公開（公告）號: CN108250267B
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李子剛;尹豐;李文君;王冬園
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)深圳研究生院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12N15/87;A61K31/7088;A61K47/62;A61K47/69;A61P35/00
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發(fā)明提供了一種多肽，其結(jié)構(gòu)式如下所示，本發(fā)明還提供了一種多肽?siRNA誘導(dǎo)共組裝體，由上述的多肽和siRNA組成。本發(fā)明還提供了上述的多肽?siRNA誘導(dǎo)共組裝體在細胞運載中的用途。本發(fā)明還提供了上述的述的多肽?siRNA誘導(dǎo)共組裝體在制備治療宮頸癌的藥物中的用途。將本發(fā)明多肽與目標(biāo)siRNA在常溫下混合孵育5min后，即可形成穩(wěn)定均一的納米粒子。細胞毒性實驗證明這種共組裝納米粒子具有較高的生物相容性，其細胞毒性和溶血毒性都很低。抗細胞增殖實驗進一步證實多肽?siRNA納米粒子可以有效地將宮頸癌細胞系HeLa阻斷在G2期，阻滯其生長。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，涉及一種多肽，具體來說是一種多肽、多肽-siRNA誘導(dǎo)共組裝體及其用途。

背景技術(shù)

RNAi技術(shù)是最廣泛應(yīng)用的生物學(xué)技術(shù)之一，由于RNAi技術(shù)對特定基因mRNA的高度特異性和高效性表達調(diào)控。因此，RNAi技術(shù)被廣泛的用于功能基因組學(xué)、遺傳學(xué)、基因治療、病毒性疾病治療等許多領(lǐng)域。然而，無論在體內(nèi)還是體外，siRNA都很容易被廣泛存在的RNase降解，并且siRNA無法單獨穿過細胞膜引發(fā)RNAi效應(yīng)，因此，RNAi技術(shù)離不開高效，低毒的siRNA運載體的幫助。

常用的siRNA轉(zhuǎn)染載體有病毒載體、脂質(zhì)體、高聚物、無機納米粒子、多肽生物載體等。其中病毒載體是一類以腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒為主的siRNA載體。病毒載體是已知的轉(zhuǎn)染效率最高的siRNA載體之一，但是因為病毒有可能不可控的插入宿主的基因組中，因此，出于安全性和操作復(fù)雜性的考慮，病毒類載體的應(yīng)用受到了很大的限制。

以脂質(zhì)體和高聚物為代表的一類化學(xué)修飾載體是目前應(yīng)用最廣泛的一類siRNA載體。其中脂質(zhì)體(如:lipo-2000)是由一個親水性的頭部和一個疏水性的尾部組成的兩親性分子，脂質(zhì)體在水中可以與siRNA形成均一穩(wěn)定的復(fù)合物，將siRNA包裹在有脂質(zhì)體分子組成的空腔內(nèi)，并通過內(nèi)吞或者膜融合的方式進入細胞，并進一步釋放出內(nèi)部的siRNA分子，引發(fā)RNAi效應(yīng)。但是，由于脂質(zhì)體自身對于細胞膜有較強的細胞毒性，有脂質(zhì)體介導(dǎo)的siRNA轉(zhuǎn)染一般在較低的脂質(zhì)體濃度下進行，并且主要限制在體外和細胞水平的轉(zhuǎn)染。

以聚乙烯亞胺PEI和PLL等陽離子聚合物為代表的高聚物是另一類廣泛應(yīng)用的siRNA運載體，PEI分子利用靜電作用負載包裹siRNA，通過內(nèi)吞作用進入細胞后，利用質(zhì)子海綿效應(yīng)使內(nèi)吞體破裂，促進siRNA的釋放。隨著PEI分子量的增大，能夠負載的siRNA的含量也越多，但同時細胞毒性也越大。因此對于PEI分子，再未進一步優(yōu)化之前，一般只用于低劑量的細胞水平的轉(zhuǎn)染。

無極金屬納米粒子是一種以納米金為代表的新型siRNA載體。其主要通過靜電相互作用與siRNA結(jié)合，通過內(nèi)吞作用進入細胞內(nèi)，并成功釋放，引發(fā)RNAi效應(yīng)。其轉(zhuǎn)染效率較高，并且對細胞沒有急性毒性作用，但是由于無機金屬納米粒子太過穩(wěn)定，很難被生物體清除，易導(dǎo)致金屬納米粒子在體內(nèi)的堆集，引發(fā)潛在的毒性反應(yīng)，從而極大的限制其應(yīng)用。

這些載體雖然都可以實現(xiàn)siRNA的有效的轉(zhuǎn)染，但同時也存在著各自的問題，對于復(fù)雜體系內(nèi)的siRNA運載，依然有許多限制和無法實現(xiàn)的困難。方便，簡單，高效，安全的siRNA運載方式依然是科研工作者關(guān)注的方向。