[發明專利]一種復合膜傳感器及其檢測副溶血性弧菌的方法

有效

• 申請號: 201810076439.0
• 申請日: 2018-01-26
• 公開（公告）號: CN108226135B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 段諾;沈默斐;王周平;吳世嘉;鄒穎
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

1.一種復合膜傳感器在檢測副溶血性弧菌中的應用，其特征在于：所述復合膜傳感器是通過將特異性識別副溶血性弧菌適配體固定在納米金表面上并修飾拉曼信號分子作為信號探針，將特異性識別副溶血性弧菌的適配體固定在由電荷作用形成的APT-AU-PDMS復合膜上作為檢測基底，構建得到的適配體-納米金-復合膜傳感器；所述檢測是取APT-AU-PDMS復合膜，加入副溶血性弧菌菌液，置于37℃搖床150rpm轉速下孵育1h，然后用PBS緩沖液清洗，再取500μL信號探針溶液與其置于37℃搖床150rpm轉速下孵育1h，再用PBS緩沖液將APT-AU-PDMS復合膜清洗，測定拉曼強度；

所述適配體-納米金-復合膜傳感器具體制備方法為：

(1)將PDMS膜用piranha溶液常溫浸沒30-90s，再用APTES溶液70℃高溫處理后去離子水反復超聲處理三遍，隨后浸沒在納米金溶液得到AU-PDMS膜；

(2)在37℃，150-200轉速的搖床條件下，將AU-PDMS膜浸沒在40nM的特異性識別副溶血性弧菌的適配體TE緩沖溶液中孵育12-48h，得到APT-AU-PDMS復合膜；

(3)向10μl濃度為10μM的適配體溶液加入等體積的濃度為1mM的TCEP溶液，靜置半小時，取1mL納米金溶液與特異性識別副溶血性弧菌的適配體溶液孵育12h后，加入10-30μL10％SDS溶液，于140-160轉速下，37℃下陳化8-18h，陳化過程中加入NaCl溶液，使其終濃度達到0.05-0.2mol/L；

(4)將拉曼信號分子4-MBA標記在與特異性識別副溶血性弧菌的適配體復合的納米金表面作為信號探針；

(5)以APT-AU-PDMS復合膜為檢測基底，建立了一個PDMS-納米金-5’端巰基化的副溶血性弧菌適配體傳感器。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述拉曼信號分子為4MBA，在1590cm^-1處有特征峰值。