[發明專利]一種多菌靈的比色檢測方法

在審

• 申請號: 201810072724.5
• 申請日: 2018-01-25
• 公開（公告）號: CN108426874A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 何曉曉;王柯敏;葉潤枝;黃金;上官瑾芳
• 申請（專利權）人: 湖南大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/33
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所(普通合伙) 43008
• 代理人: 黃麗

本發明提供了一種多菌靈的比色檢測方法，包括下述的步驟：將待測樣品與DNA在水溶液中進行第一次混合反應，所述DNA包含SEQ ID NO.1所示的序列；然后加入金納米顆粒，使未與多菌靈結合的DNA吸附在金納米顆粒上；之后加入無機鹽進行第二次混合反應，通過溶液體系顏色變化定性判斷有無多菌靈，通過采用紫外可見分光光度法定量檢測多菌靈的濃度。本發明檢測方法具有操作簡單、快速、靈敏性高、選擇性好等優點。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種多菌靈的比色檢測方法。

背景技術

多菌靈，化學名為N-2-苯并吡唑基氨基甲酸甲酯。多菌靈是一種廣譜內吸性殺菌劑，干擾病原菌有絲分裂中紡錘體的形成，影響細胞分裂，起到殺菌作用，對多種作物由真菌(如半知菌、多子囊菌)引起的病害具有防治效果，廣泛用于果樹、蔬菜、糧棉和林木病害的防治，但它的殘留期比較長，對哺乳動物有一定的毒害作用，研究表明，多菌靈能引起肝病，還能導致染色體畸變等病癥。因此，發展檢測多菌靈殘留分析方法具有重要的意義。

傳統的用于多菌靈測定的方法主要有：(1)通過固相萃取法對樣品進行提取，再利用高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯質譜法等色譜測定的方法。色譜法檢測準確，但成本高，前處理過程復雜，檢測時間長，需要具備一定技術水平的專業人員才能進行操作，適合在實驗室進行，限制了該方法在大規模的農藥殘留檢測和現場檢測中的應用。(2)使用電化學法檢測多菌靈。通過不同的電極材料例如碳納米管或石墨烯修飾的玻碳電極、摻磷螺旋碳納米纖維、摻硼金剛石電極、環糊精/石墨烯復合片等實現對多菌靈的電化學檢測。該方法相較于色譜法顯示出省時，低成本，易使用且靈敏度高的優點。(3)根據多菌靈分子結構和特異基團設計并合成多菌靈的半抗原，合成人工抗原從而制備出理想效價的抗體，發展的一種多菌靈殘留酶聯免疫吸附測定(ELISA:Enzyme Linked Immunosorbent Assay)方法。并研制了ELISA試劑盒定量定性分析多菌靈，能對果、蔬、茶中農藥殘留實現快速、現場檢測。

傳統的檢測多菌靈的色譜法需要大型的儀器，并且其程序繁瑣，費時費力，傳統的前處理過程過于繁瑣，回收率不穩定。大量使用有機溶劑對環境造成污染，在復雜的回收過程中易造成多菌靈損失且靈敏度低。而電化學法選擇性低且重復性不高，在復雜樣品中易受到同其他農藥干擾從而影響檢測結果，難以實現實際樣品中的特異性檢測。酶聯免疫吸附測定法操作步驟復雜，影響反應因素較多，且試劑盒成本高，無法實現多菌靈的低成本快速檢測。因此，發展一種快速的，低成本的，簡單易行的特異性好靈敏度高的多菌靈檢測方法具有非常重要的意義。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種多菌靈的比色檢測方法，不僅可快速定性檢測多菌靈，還可以定量檢測，操作簡單快速、靈敏性高、選擇性好。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

一種多菌靈的比色檢測方法，包括下述的步驟：

將待測樣品與DNA在水溶液中進行第一次混合反應，所述DNA均包含SEQ ID NO.1所示的序列；

然后加入金納米顆粒，使未與多菌靈結合的DNA吸附在金納米顆粒上；

之后加入無機鹽進行第二次混合反應，通過溶液體系顏色變化定性判斷有無多菌靈，通過采用紫外可見分光光度法定量檢測多菌靈的濃度。

優選的，所述第一次混合反應和第二次混合反應均在在室溫條件下進行。

優選的，所述第一次混合反應的時間為10min～20min，所述第二次混合反應的時間為10min～20min。

優選的，所述第一次混合反應之前，先對DNA鏈退火處理，使DNA解鏈，然后再與待測樣品反應。

優選的，所述金納米顆粒的粒徑為11nm～15nm。

優選的，所述無機鹽為氯化鈉。