[發明專利]不同體積數字PCR定量分析方法

在審

• 申請號: 201810070368.3
• 申請日: 2018-01-24
• 公開（公告）號: CN110066856A
• 公開（公告）日: 2019-07-30
• 發明（設計）人: 盛廣濟
• 申請（專利權）人: 思納福（北京）醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 北京華進京聯知識產權代理有限公司 11606
• 代理人: 趙永輝

通過不同體積數字PCR的定量分析方法，可以獲得的ln(c)相應的標準差σ以及置信區間。通過ln(c)相應的標準差σ以及置信區間可以得到待測核酸擴增反應液的核酸濃度為c，因此也可以獲知所述待測核酸擴增反應液中含有的DNA起始拷貝數目。所述不同體積數字PCR的定量分析方法可以利用少于200個微液滴實現5個數量級的檢測動態范圍，提高了數字PCR檢測儀器的檢測動態范圍。并且，其性能可以和擁有12000個微液滴的單一體積數字PCR相媲美，節省了儀器的成本，耗材成本降低。

技術領域

本發明涉及數字PCR定量分析領域，特別是涉及一種不同體積數字PCR定量分析方法。

背景技術

數字PCR(Digital PCR，dPCR)是一種核酸分子絕對定量技術。相較于qPCR，數字PCR可讓你能夠直接數出DNA分子的個數，是對起始樣品的絕對定量。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量，而數字PCR則讓你能夠直接數出DNA分子的個數，是對起始樣品的絕對定量。但是，目前數字PCR定量檢測無論是微孔式還是液滴式的數字PCR技術，采用的都是是單一體積數字PCR技術。

單一體積數字PCR的定量上限主要取決于反應單元的體積和數量，檢測下限與樣本總體積相關。單一體積數字PCR的定量分析方法需要連續對待測核酸擴增反應液進行稀釋，增加了試劑的用量和交叉污染的風險，操作步驟繁瑣。因此，單一體積數字PCR的定量分析方法縮小了數字PCR檢測儀器的檢測動態范圍，從而無法提高檢測靈敏度。

發明內容

基于此，有必要針對單一體積數字PCR的定量檢測方法靈敏度低的問題，提供一種檢測動態范圍大的的不同體積數字PCR定量分析方法。

本發明提供一種不同體積數字PCR的定量分析方法，包括：

S4310：獲取所有微液滴體積v₁，v₂，...v_m，所述體積為v₁，v₂，...v_m依次對應的微液滴的數目n₁，n₂，…，n_m，以及所述體積為v₁，v₂，...v_m依次對應的微液滴核酸擴增后的陰性微液滴數目b₁，b₂，…，b_m；

S4320：根據所有微液滴核酸擴增后的相關參數v₁、v₂，...v_m，n₁，n₂，…，n_m，b₁，b₂，…，b_m，構建關于待測核酸擴增反應液濃度c的聯合二項分布函數f(c)；

S4330：根據聯合二項分布函數f(c)，求使得所述聯合二項分布函數f(c)取極值時c的值；

S4340：將所述聯合二項分布函數f(c)轉化為關于ln(c)的聯合二項分布函數F(Λ)，獲得關于ln(c)的標準差以及置信區間；

S4350：根據ln(c)的標準差以及置信區間，獲取所述待測核酸擴增反應液濃度c的標準差以及置信區間。

在其中一個實施例中，所述S4310包括：

S4311：將含有目標核酸的樣品溶液微滴化，獲得多個不同體積v₁，v₂，...v_m的微液滴，所述微液滴體積為v₁，v₂，...v_m依次對應的微液滴的數目n₁，n₂，…，n_m；