[發明專利]一種胃癌新型分子標記物tRF-5026a的檢測及應用

有效

• 申請號: 201810062646.0
• 申請日: 2018-01-23
• 公開（公告）號: CN108165634B
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發明（設計）人: 郭俊明;謝依;肖丙秀
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 徐雪波;葉桂萍

本發明涉及一種用于胃癌診斷的tRF分子標志物，其特征在于：該tRF為tRF?5026a，本發明還提供一種檢測胃癌tRF分子標志物的方法，包括如下步驟:(1)收集胃癌組織；(2)獲得濃度純度較高的RNA；(3)前處理并逆轉錄成cDNA；(4)進行熒光染料法qRT?PCR檢測；(5)tRF和外參基因采用特異性上下游擴增引物；(6)通過統計出胃癌組織中目的tRF和外參基因的Cq值；(7)采用ΔCq＝Cq_(targettRF)?Cq_(reference)的計算方法對tRF進行相對定量，與現有技術相比，本發明的優點在于在胃癌組織中的特異性表達下調tRF?5026a可作為胃癌診斷的新型分子標記物。

技術領域

本發明涉及一種胃癌組織中tRNA衍生片段的檢測方法，尤其涉及一種熒光染料法實時定量逆轉錄-聚合酶鏈式反應檢測胃癌組織中tRF的方法及其應用。

背景技術

全球癌癥統計中，胃癌發病率列居前位，中國又是胃癌高發大國。盡管診斷技術在不斷提高，以手術治療為主的綜合治療手段越來越豐富，但胃癌依舊是全球主要癌癥致死性疾病之一，每年約有100萬個新發病例，死亡人數達到72萬余人【趙倩，楊曉燕，甘潤良.胃癌的分子分型研究進展.中華病理學雜志,2016,45(10):737-741】。中國是胃癌的高發國，每年我國新增約40萬例胃癌患者，約占世界胃癌發病人數的42％。由于胃癌早期癥狀不明顯，并且又缺乏特異的早期胃癌診斷方法【Liu X,Meltzer SJ.Gastric Cancer in theEra of Precision Medicine.Cell Mol Gastroenterol Hepatol,2017,3(3):348-358】，已有的腫瘤標志物如癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、糖抗原19-9(Carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)等在胃癌中的檢出率均不高。絕大多數胃癌患者在診斷時已處于晚期，使得患者的生存期較短【Chia NY,Tan P.Molecular classificationof gastric cancer.Ann Oncol,2016,27(5):763-9.】。因而尋找利于早期診斷和早期治療的生物標志物一直是腫瘤研究的熱點。隨著分子生物學和分子診斷研究的深入，科學家逐漸將目光轉向tRF，因其在抑癌與致癌途徑中顯露出的潛在作用而成為腫瘤研究的新熱點。它們由成熟tRNA或前體tRNA在不同位點特異性剪切產生，是一類廣泛存在于真核生物細胞中的非編碼小RNA分子。tRF主要有tRF-5、tRF-3和tRF-1等3亞類，分別來自成熟tRNA的D環至反密碼子環莖區間切割至5'端、T環開始至3'端和前體tRNA的3'端尾部，長度為14～30個核苷酸(nucleotide，nt)。tRF具有多種生物學功能，既可以在應激反應中作為信號分子，又可以作為基因表達的調節者。這些特點使得tRF在疾病診斷與治療方法的開發應用上具有廣闊的前景。

發明內容

本發明所要解決的一個技術問題是，針對上述現有技術現狀而提供一種tRF-5026a作為胃癌檢測中的分子標記物，利用該分子標記物可以簡單、快捷地進行胃癌診斷。

本發明所要解決的另一個技術問題是針對上述現有技術現狀而提供一種在胃癌組織中檢測tRF-5026a的方法。

本發明所要解決的又一個技術問題是針對上述現有技術現狀而提供一種tRF-5026a在胃癌診斷中的應用。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：該用于胃癌檢測的tRF分子標記物，其特征在于：該tRF為tRF-5026a，其基因在基因組上的定位為：chr6-26538282-26538354，對應的tRNA為chr6.trna9-ValCAC，該tRF的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，為GTTTCCGTAGTGTAGTGG。

進一步地，所述tRF-5026a在胃癌患者癌組織中特異性表達水平下調。