[發明專利]一種LMP-2重組腺相關病毒載體及其構建方法與應用

在審

• 申請號: 201810054337.9
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108546715A
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發明（設計）人: 劉勇
• 申請（專利權）人: 廣東拓譜康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/864
• 分類號: C12N15/864;C12N15/66;A61K35/15;A61P35/00
• 代理公司: 廣州勝沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 孫文卉

本發明公開了一種LMP?2重組腺相關病毒載體及其構建方法與其應用。該LMP?2重組腺相關病毒載體是將腺相關病毒載體中的腺相關病毒結構基因替換為LMP?2基因或其突變型基因得到的重組腺相關病毒載體。本發明的LMP?2重組腺相關病毒載體可將其攜帶的野生型或突變型的LMP?2基因輸送入單核細胞?巨噬細胞?樹突狀細胞系中，攜帶有這些特異性抗原基因的細胞被用于刺激免疫系統的效應細胞。實驗證明，被本發明的rAAV感染的DC所誘導的CTL在患者體內可有效地抑制惡性腫瘤細胞的生長或者殺滅腫瘤細胞，因而，本發明的LMP?2重組腺相關病毒載體或與本發明LMP?2重組腺相關病毒載體相關的產品可被用于制備抗腫瘤藥物。

技術領域

本發明屬于及載體及其應用，具體涉及一種LMP-2重組腺相關病毒載體及其構建方法與應用。

背景技術

腺相關病毒(AAV)的基因結構已經被鑒定。1983年，Samulski等人描述了AAV的末端重復片段(上游5’端片段，下游3’端片段)(Samulski RJ,Srivastava A,Berns KI,Muzyczka N.Rescue of adeno-associated virus from recombinant plasmids:genecorrection within the terminal repeats of AAV.Cell.33:135-143.)。1984年，Hermonat等人描述了AAV的低感染顆粒(lip)基因和包膜(cap)基因(Hermonat PL,LabowMA,Wright R,Berns KI,Muzyczka N.Genetics of adeno-associated virus:isolationand preliminary characterization of adeno-assoc iated virus type 2mutants.JVirol.51:329-339.Hermonat,P.L.,and Muzyczka,N.Use of adeno-associated virusas a mammalian DNA cloning vector:trans duction of neomycin resistance intomammalian tissue culture cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81:6466-6470.)。1986年，Labow等人鑒定了位于上游5’端片段和rep基因之間的p5啟動子(Labow MA,HermonatPL,Berns KI.Pos itive and negative autoregulation of the adeno-associatedvirus type 2genome.J Virol.160:251-258.)。

1984年，美國博沃基因國際有限公司的主要技術技術負責人之一PaulL.Hermonat教授率先證明AAV載體可用于人類疾病的基因治療(Hermonat,P.L.,andMuzyczka,N.Use of adeno-associated virus as a mammalian DNA clonin g vector:transduction of neomycin resistance into mammalian tissue culture cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81:6466-6470.)。目前，主要是歐美國家在進行以AAV為基礎的基因治療人類疾病的臨床試驗。據美國糧食和藥品管理局統計，現有十余項以AAV為基礎的基因治療臨床試驗正在進行，主要是將攜帶治療基因的AAV病毒注入患者體內，使其在體內表達治療基因，從而達到治療疾病的目的。主要針對治療的疾病有帕金森氏綜合癥、風濕性關節炎、血友病、心力衰竭、進行性肌萎縮和奧茲海默綜合癥等非腫瘤性疾病。但是，應用于臨床治療的AAV病毒仍存在一些問題，例如攜帶治療基因大小受到明顯限制，病毒本身不穩定，導致治療基因表達不穩定，以及造成療效不一致。雖然AAV病毒本身的免疫原性很弱，但所表達的治療基因容易在患者體內誘發自身免疫反應，甚至導致嚴重的毒副作用。