[發(fā)明專利]一種LMP-2重組腺相關(guān)病毒載體及其構(gòu)建方法與應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810054337.9
• 申請(qǐng)日: 2018-01-19
• 公開（公告）號(hào): CN108546715A
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東拓譜康生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/864
• 分類號(hào): C12N15/864;C12N15/66;A61K35/15;A61P35/00
• 代理公司: 廣州勝沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 孫文卉

1.一種LMP-2重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于：將腺相關(guān)病毒載體中的腺相關(guān)病毒的結(jié)構(gòu)基因替換為EB病毒的LMP-2基因或其突變型基因得到的重組腺相關(guān)病毒載體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于：所述LMP-2基因重組腺相關(guān)病毒載體是在已知的腺相關(guān)病毒載體的基礎(chǔ)上進(jìn)行改造得到的，所述腺相關(guān)病毒結(jié)構(gòu)基因?yàn)镽ep和Cap/Lip基因，LMP-2基因?yàn)橐环N腫瘤相關(guān)抗原基因，其突變型基因是具有相同功能的LMP-2基因片段。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于：所述腺相關(guān)病毒載體具有p5啟動(dòng)子、巨噬細(xì)胞病毒(cytomegalovirus，CMV)啟動(dòng)子、beta肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子和SV40病毒啟動(dòng)子中的一個(gè)或幾個(gè)啟動(dòng)子。

4.一種攜帶LMP-2基因或其突變型基因的重組腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建方法，其特征在于：使用常規(guī)的基因重組的方法，先將腺相關(guān)病毒載體中的腺相關(guān)病毒結(jié)構(gòu)基因剔除，再用EB病毒的LMP-2基因或其突變型基因取代該剔除基因，得到重組腺相關(guān)病毒載體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的構(gòu)建方法，其特征在于：還包括以下步驟：將所述腺相關(guān)病毒的p5啟動(dòng)子替換為巨噬細(xì)胞病毒啟動(dòng)子、beta肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子和SV40病毒啟動(dòng)子中的一個(gè)或幾個(gè)啟動(dòng)子。

6.一種與攜帶LMP-2基因或其突變型基因的重組腺相關(guān)病毒載體相關(guān)的產(chǎn)品，其特征在于：包括LMP-2基因或其突變型基因重組腺相關(guān)病毒的質(zhì)粒載體、LMP-2基因或其突變型基因重組腺相關(guān)病毒的病毒載體、被所述LMP-2基因或其突變型基因重組腺相關(guān)病毒的病毒載體感染或轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的產(chǎn)品，其特征在于：所述細(xì)胞系為單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-樹突狀細(xì)胞系或T淋巴細(xì)胞系，所述重組腺相關(guān)病毒載體中的相關(guān)基因—L MP-2基因或其突變型基因可在單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-樹突狀細(xì)胞系或T淋巴細(xì)胞系中在轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子的作用下獲得表達(dá)。

8.如權(quán)利要求1～4所述的以及如權(quán)利要求4或5所述方法制備得到的攜帶LMP-2基因或其突變型基因的重組腺相關(guān)病毒載體以及如權(quán)利要求6或7所述的產(chǎn)品在制備治療抗腫瘤藥物中的用途。

9.一種抗腫瘤藥物，其特征在于，包含有效量的權(quán)利要求1～4所述的以及如權(quán)利要求4或5所述方法制備得到的攜帶LMP-2基因或其突變型基因的重組腺相關(guān)病毒載體以及如權(quán)利要求6或7所述的產(chǎn)品以及藥學(xué)上可接受的載體。

10.一種體外殺滅腫瘤的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A)將腫瘤所在體系(該體系可通過人工模擬的方式產(chǎn)生)中自然產(chǎn)生的單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-樹突狀細(xì)胞或T淋巴細(xì)胞被本發(fā)明攜帶野生型LMP-2基因的重組腺相關(guān)病毒載體和/或攜帶突變型LMP-2基因的重組腺相關(guān)病毒載體感染或轉(zhuǎn)染，或被與本發(fā)明LMP-2重組腺相關(guān)病毒載體相關(guān)的產(chǎn)品處理，各自得到處理后的細(xì)胞；

B)將步驟A)中處理后的單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-樹突狀細(xì)胞加入腫瘤所在體系中殺滅腫瘤；或?qū)⑽幢惶幚淼腡淋巴細(xì)胞與所述處理后的單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-樹突狀細(xì)胞混合培養(yǎng)形成抗原特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，再將該抗原特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞加入腫瘤所在體系中殺滅腫瘤；或?qū)⒈惶幚淼腡淋巴細(xì)胞和未被處理的單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-樹突狀細(xì)胞加入腫瘤所在體系中殺滅腫瘤。