[發明專利]一種反復腦缺血再灌注損傷小鼠模型的建立方法

在審

• 申請號: 201810045286.3
• 申請日: 2018-01-17
• 公開（公告）號: CN108095850A
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: 趙建新;田元祥;劉雅儒;王奕力;李曌嬙;張海霞
• 申請（專利權）人: 北京中醫藥大學第三附屬醫院
• 主分類號: A61D1/00
• 分類號: A61D1/00
• 代理公司: 北京中海智圣知識產權代理有限公司 11282
• 代理人: 徐金偉

本發明涉及一種反復腦缺血再灌注損傷小鼠模型建立方法，包括如下操作：選取6?7周齡的小鼠，麻醉所選取的小鼠；固定小鼠體位并進行備皮；消毒小鼠頸部皮膚，剪開頸部皮膚并鈍性分離皮下組織；暴露小鼠的雙側頸總動脈；將小鼠雙側頸總動脈與周圍組織、神經分離；夾閉雙側頸總動脈，并剪小鼠尾放血3ml，熱凝止血；停止夾閉，恢復血流；繼續實施步驟(4)和(5)，并且不再剪小鼠尾放血；實施結束后，縫合小鼠皮膚，反復腦缺血再灌注損傷小鼠模型建立完成；本發明所述建立方法符合目前人類腦缺血疾病的發病基本理念，能真實模擬腦缺血疾病的病理過程，并且建立的反復腦缺血再灌注損傷小鼠模型成功率高，穩定性好。

技術領域

本發明屬于實驗動物模型領域，具體涉及一種反復腦缺血再灌注損傷小鼠模型建立方法。

背景技術

中風和循環停滯干擾血液流向大腦，造成相當大的組織損傷。在世界范圍，中風是第二 大死亡原因。隨著全球人口在未來20年的老齡化，中風的發病率將上升，減少或預防腦缺血 患者神經損傷的主要方法是迅速恢復缺血血流。然而，血液循環的恢復會導致缺血性腦損傷 患者的額外損傷和加重神經功能缺損，經過多年的深入研究，仍未完全理解其基本機制，一 種快速、有效的嚙齒類動物的反復腦缺血再灌注損傷模型是目前該類疾病的中醫學，病因學， 病理學和藥學研究所亟需的。

目前廣泛采用的七血管閉塞法、四血管閉塞法、心臟驟停全腦缺血模型法，存在著制作 過程復雜，不能一次完成，動物的死亡率高以及缺血效果不明顯的問題。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種反復腦缺血再灌注損傷小鼠模型建立方 法。

為實現上述技術目的，本發明所述模型建立方法的技術方案是這樣實現的：

所述模型建立方法，包括如下具體步驟：

步驟1、選取6-7周齡的小鼠，麻醉所選取的小鼠；

步驟2、固定小鼠體位，采用剃毛器具去除小鼠頸部毛發進行備皮；

步驟3、消毒小鼠頸部皮膚，剪開頸部皮膚并鈍性分離皮下組織；

步驟4、暴露小鼠的出雙側頸總動脈，用醫用鑷子將小鼠頸部皮膚提起，并用眼科直剪 沿小鼠頭尾方向剪開一個切口，再用醫用鑷子沿上下方向擴展切口1cm；

步驟5、將雙側頸總動脈與周圍組織、神經進行分離；

5.1、鑒于小鼠頸總動脈和神經并行在氣管同側，使用第一只鑷子的單側鑷腿沿氣管順勢 向下將頸總動脈挑住，并保持在氣管平行位置；

5.2、再用第二只鑷子兩側鑷腿置于動脈和神經下面，固定保持在氣管平行位置，退出第 一只鑷子的單側鑷腿；將第一只鑷子的單側鑷腿伸入動脈與神經之間，第一只鑷子的單側鑷 腿的鋸齒面朝向頸總動脈，光滑面朝向神經，沿血管走行方向滑動一次，分離出長3mm的縫 隙；退出第二只鑷子，此時小鼠的神經在下、頸總動脈在上，第一只鑷子的單側鑷腿在兩者 之間；使用第一只鑷子抬起頸總動脈高出氣管水平，以增大頸總動脈與神經之間縫隙寬度； 使用第二只鑷子的單側鑷腿伸入縫隙，第二只鑷子的單側鑷腿的光滑面朝向神經側，在神經 血管粘連出輕輕滑動，繼而剝離，直至剝離長度達到8mm，退出第二只鑷子的單側鑷腿；仔 細觀察頸總動脈，單純的頸總動脈因為失去了神經的伴行和包膜的包裹，顏色呈紅色，沒有 光澤，至此能夠確認小鼠頸總動脈與周圍組織、神經完成分離，并將用生理鹽水濕潤的手術 絲線穿過頸總動脈下，頸總動脈兩側絲線分別預留3cm；

步驟6、夾閉小鼠雙側頸總動脈，并使用眼科直剪剪小鼠尾，放血3ml，熱凝止血；

優選的，在夾閉過程中，在小鼠頸部兩側加墊紗布，抬高動脈夾的尾部，使動脈夾平放， 避免動脈夾夾閉血管后因為自重斜落在頸部皮膚上，形成杠桿，高高挑起頸動脈，使其因牽 拉或干燥而造成損傷；

步驟7、停止夾閉小鼠雙側頸總動脈，恢復血流；