[發(fā)明專(zhuān)利]以CD20為靶點(diǎn)的特異性抗體、CAR-NK細(xì)胞及其制備和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810036244.3
• 申請(qǐng)日: 2018-01-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108285486A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李華順
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江阿思科力生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K16/28
• 分類(lèi)號(hào): C07K16/28;C07K19/00;C12N15/13;C12N15/62;C12N5/10;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京布瑞知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11505
• 代理人: 孟潭

1.抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含VH1鏈和/或VL1鏈和/或VH2鏈和/或VL2鏈，所述VH1鏈和/或VL1鏈和/或VH2鏈和/或VL2鏈之間直接連接或通過(guò)連接肽連接。

2.如權(quán)利要求1所述的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段，其結(jié)構(gòu)包括：

VH1-VL1-VH2-VL2，和/或VH1-VH2-VL2-VL1，和/或VH1-VL2-VL1-VH2，和/或VL1-VH1-VH2-VL2，和/或VL1-VH2-VH1-VL2，和/或VL1-VL2-VH1-VH2，和/或VH2-VH1-VL1-VL2，和/或VH2-VL1-VH1-VL2，和/或VH2-VL2-VH1-VL1，和/或VL2-VH1-VL1-VH2，和/或VL2-VL1-VH1-VH2，和/或VL2-VH2-VH1-VL1。

3.如權(quán)利要求1或2所述的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段，所述VH1鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的序列或其同源序列，和/或所述VL1鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的序列或其同源序列，和/或所述VH2鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示的序列或其同源序列，和/或所述VL2鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的序列或其同源序列；優(yōu)選地，所述的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示的序列或其同源序列。

4.表達(dá)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段的核苷酸序列。

5.如權(quán)利要求4所述的核苷酸序列，其中所述VH1鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示的序列或其簡(jiǎn)并序列，和/或所述VL1鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示的序列或其簡(jiǎn)并序列，和/或所述VH2鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示的序列或其簡(jiǎn)并序列，和/或所述VL2鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示的序列或其簡(jiǎn)并序列；優(yōu)選地，所述的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：10所示的序列或其簡(jiǎn)并序列。

6.Anti CD20 CAR-NK細(xì)胞，其能夠表達(dá)嵌合抗原受體，所述嵌合抗原受體包括權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段，和/或權(quán)利要求4或5所表達(dá)的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段。

7.如權(quán)利要求6所述的Anti CD20 CAR-NK細(xì)胞，所述嵌合抗原受體還包含跨膜結(jié)構(gòu)域和/或共刺激信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)；優(yōu)選地，所述的跨膜結(jié)構(gòu)域選自：CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD134、CD137、ICOS和CD154中的一種或多種的跨膜結(jié)構(gòu)域；優(yōu)選地，所述的跨膜結(jié)構(gòu)域?yàn)镃D8跨膜結(jié)構(gòu)域；和/或，

所述的共刺激信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)包含共刺激分子的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，所述的共刺激分子選自：CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、CD2、CD4、CD5、CD28、CD134、CD137、ICOS、CD154、4-1BB和OX40中的一種或多種；優(yōu)選地，所述的共刺激信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)包含4-1BB和CD3ζ胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域；優(yōu)選地，所述抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段能夠特異性結(jié)合腫瘤特異性抗原CD20，并通過(guò)跨膜結(jié)構(gòu)域和共刺激信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)激活該NK細(xì)胞。

8.如權(quán)利要求7所述的Anti CD20 CAR-NK細(xì)胞，所述嵌合抗原受體是結(jié)構(gòu)為scFV1-scFV2-CD8-4-1BB-CD3ζ的融合蛋白，其中所述的scFV1和scFV2能夠特異性結(jié)合CD20分子。

9.如權(quán)利要求8所述的Anti CD20 CAR-NK細(xì)胞，所述SCFV1-scFV2-CD8-4-1BB-CD3ζ融合蛋白的氨基酸的序列如SEQ ID NO：11或其同源序列。