[發明專利]一種黃瓜大孢子培養過程中黃化胚狀體轉化正常植株的方法

有效

• 申請號: 201810035186.2
• 申請日: 2018-01-15
• 公開（公告）號: CN108157179B
• 公開（公告）日: 2020-01-07
• 發明（設計）人: 劉立功;張峰;于拴倉;趙泓;王晶;李軍;張燕麗
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 11245 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種黃瓜大孢子培養過程中黃化胚狀體轉化正常植株的方法。本發明公開的黃化胚狀體轉化正常植株的方法，包括：將黃瓜黃化胚狀體在轉化培養基上進行培養，實現黃化胚狀體的去黃化并生長為正常植株；轉化培養基含有赤霉素和萘乙酸，赤霉素在轉化培養基中的濃度為0.5?2mg·L^?1，萘乙酸在轉化培養基中的濃度為0.05?0.2mg·L^?1。實驗證明，利用本發明的方法可使黃化胚狀體成功轉綠并得到正常植株，轉化比率可達68.6％，本發明的方法可以大大提高黃瓜大孢子培養的植株再生率，具有很高的實用價值。

技術領域

本發明涉及生物技術領域中，一種黃瓜大孢子培養過程中黃化胚狀體轉化正常植株的方法。

背景技術

黃瓜大孢子培養通過誘導黃瓜未授粉子房產生胚狀體，再經過染色體加倍成二倍體,可以快速產生純合的育種新材料(純系)，提高育種效率，還可用作遺傳轉化的優良受體材料。通過黃瓜大孢子培養獲得的健康胚狀體要轉移到再生培養基中進行植株的再生，而在胚狀體的發生過程中由于自身的單倍體倍性、培養基的成份和外界培養環境條件等因素導致很大比例的胚狀體發生黃化現象(胚狀體的胚芽為黃色，培根介于黃色和白色之間，整個胚狀體失去綠色)，使得胚狀體不能發育成健康的植株，嚴重影響黃瓜大孢子培養的再生植株比率。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何將黃瓜大孢子培養過程中的黃化胚狀體去黃化。

為解決上述技術問題，本發明首先提供了黃瓜黃化胚狀體去黃化的方法，所述方法包括：將黃瓜黃化胚狀體在轉化培養基上進行培養，實現所述黃化胚狀體的去黃化；

所述轉化培養基含有赤霉素和萘乙酸，赤霉素在所述轉化培養基中的濃度為0.5-2mg·L^-1，萘乙酸在所述轉化培養基中的濃度為0.05-0.2mg·L^-1。

上述方法中，赤霉素在所述轉化培養基中的濃度可為1mg·L^-1。萘乙酸在所述轉化培養基中的濃度可為0.1mg·L^-1。

所述轉化培養基具體可為向MS培養基中添加赤霉素和萘乙酸得到的培養基。

上述方法中，在進行所述培養時，所述黃化胚狀體的胚根在所述轉化培養基表面以下。即在進行所述培養時，需將所述黃化胚狀體的胚根插到所述轉化培養基中，此處對胚根插入至培養基中的深度沒有特殊要求，只需將胚根插入至培養基中即可。

上述方法中，所述培養的光周期可為：光照/黑暗時間為12-18h/12-6h，如16h/8h。

上述方法中，所述培養時，光照時的光照強度可為3000LUX-8000LUX，如5000LUX。

上述方法中，所述培養的溫度可為20-28℃。具體的，在進行所述培養時，光照時的溫度可為24-28℃，如26℃；黑暗時的溫度可為20-25℃，如22℃。

所述培養時間可為15-25天，如20天。

上述方法中，所述胚狀體可為由黃瓜大孢子培養得到的胚狀體。

本發明還提供了利用黃瓜黃化胚狀體培養黃瓜植株的方法，所述方法包括：利用所述黃瓜黃化胚狀體去黃化的方法將黃瓜黃化胚狀體去黃化，然后培養得到黃瓜植株。

所述轉化培養基，也屬于本發明的保護范圍。

本發明還提供了下述任一應用：

X1、所述轉化培養基在黃瓜育種中的應用；

X2、所述轉化培養基在黃瓜單倍體育種的應用；

X3、所述轉化培養基在制備黃瓜單倍體中的應用；

X4、所述方法在黃瓜育種中的應用；