[發(fā)明專利]一種殼寡糖接枝共聚物G3.0及其制備方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810034263.2
• 申請日: 2018-01-14
• 公開（公告）號: CN108276535B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設計）人: 熊春華;曹彥美;閻亞利;王小青;韓曉祥;修麗麗;婁燕
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: C08F285/00
• 分類號: C08F285/00;C08F220/14;C08F251/00;C08F8/32;A23L3/3562
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 冉國政

1.一種殼寡糖接枝共聚物G3.0，其特征在于其分子式如下：

其中n為任意整數(shù)值；

其具體的制備步驟如下：

1)稱取一定量的殼聚糖通過高速攪拌使其充分溶解于一定量的1％(v/v)乙酸溶液中，然后將溶液轉移至石英三頸瓶內，添加一定量的30％(v/v)H₂O₂，正確安裝于微波合成儀腔體內，注意一定要使超聲波探頭沒到溶液的界面以下；設置微波功率300w，反應30min,打開紫外燈光照進行輔助降解，待實驗結束，將溶液在40℃度下水浴旋蒸濃縮，然后進行冷凍干燥24h，即可得到粘均分子量M_η在25000左右的殼低聚糖樣品；上述乙酸加入量與殼聚糖的總量關系如下：每3g殼聚糖加入100mL上述乙酸溶液，H₂O₂加入量與殼聚糖的總量關系如下：每1g殼聚糖加入0.1mL30％H₂O₂；

2)按照質量比為1：1：1的比例稱取一定量的木瓜蛋白酶、果膠酶和纖維素酶溶于pH＝5.5的HAC-NaAC的緩沖溶液中，配制成1mg/mL的酶液，待用；將上述經(jīng)微波降解后的殼低聚糖溶液的pH調節(jié)至5.5，按照酶與底物的濃度之比為1：10，加入上述待用酶液，攪拌均勻，并置于45℃的恒溫水浴槽中酶解4h；完成后煮沸加熱10min使酶滅活，40℃下減壓蒸餾濃縮得到制備所需的反應原料殼寡糖樣品溶液；

3)殼寡糖的制備步驟還包括對制備所得的殼寡糖粉末進行分子量分級，選取分子量為3500-7000的殼寡糖作為原料；具體分級方法如下：分別選取直徑為25mm截留分子量7000和直徑34mm截留分子量為3500的透析袋進行前處理，去除金屬離子；將直徑較小的透析袋套入直徑較大的透析袋中，其中一端用透析袋夾固定，蒸餾水沖洗干凈，然后用5mL的移液槍移取步驟 2 ） 制備的殼寡糖樣品溶液裝入里層透析袋內，蒸餾水填充雙層透析袋之間的間隙，透析袋夾封口，然后放入裝有蒸餾水的大燒杯中透析5d；透析完成后將雙層膜間隙的液體取出，冷凍干燥，即可得到特定分子量的反應原料殼寡糖；

4)稱取一定量的殼寡糖，加入1％(v/v)乙酸作為反應溶劑；乙酸加入量與殼寡糖的總量關系如下：每1g殼寡糖中加入上述乙酸25ml；充分溶解，向瓶內通入氮氣移除氧氣；在氮氣保護下加入一定量的硝酸鈰銨作為引發(fā)劑，引發(fā)劑的加入量與殼寡糖的質量比為1.5:1-2.5:1；然后緩慢地逐滴加入適量丙烯酸甲酯；上述殼寡糖和丙烯酸甲酯的反應摩爾比為1：8—1：8.5；設置攪拌速度為200rpm，40℃—55℃溫度下連續(xù)反應8h—10h；待反應完成后，將反應所得物G0.5濾出，接著將濾出的反應所得物G0.5先用反應溶劑1％(v/v)乙酸抽濾3次，再依次丙酮、乙醚、無水乙醇反復沖洗3次，除去未反應的丙烯酸甲酯，最后放入50℃真空干燥箱烘干備用；

5)稱取上述步驟制得備用的G0.5，加入色譜級的甲醇溶劑浸泡12h，甲醇的加入量與G0.5的總量關系如下：每1mg G0.5中加入上述甲醇0.5ml；控制反應溫度為20℃，逐滴加入分析純乙二胺：乙二胺的加入量與G0.5的總量關系如下：每1mg G0.5加入乙二胺0.08mL；N₂保護下反應8h；待反應完成后，將反應所得物G1.0濾出，用反應溶劑甲醇沖洗3遍，然后再依次用無水乙醇、蒸餾水反復洗滌3次，置于50℃真空干燥備用；

6)稱取步驟5)所得G1.0置于三頸燒瓶中，加入色譜級甲醇溶劑浸泡12h，甲醇的加入量與G1.0的總量關系如下：每1mg G1.0中加入上述甲醇0.4ml；然后在氮氣保護下逐滴加入丙烯酸甲酯，丙烯酸甲酯的加入量與G1.0的總量關系如下：每1mg G1.0中加入上述丙烯酸甲酯0.1ml；在45℃下連續(xù)反應8h后，濾出G1.5，按照G0.5的洗滌方法純化樣品，置于50℃真空干燥箱干燥備用；

7)稱取上述步驟制得備用的G1.5，加入色譜級甲醇溶劑浸泡12h，甲醇的加入量與G1.5的總量關系如下：每1mg G1.5中加入上述甲醇0.5ml；控制反應溫度為20℃，逐滴加入分析純乙二胺：乙二胺的加入量與G1.5的總量關系如下：每1mg G1.5加入乙二胺0.08mL；N₂保護下反應8h；待反應完成后，將反應所得物G2.0濾出，用反應溶劑甲醇沖洗3遍，然后再依次用無水乙醇、蒸餾水反復洗滌3次，置于50℃真空干燥即得；

8)稱取步驟7)所得G2.0，加入色譜級甲醇溶劑浸泡12h，甲醇的加入量與G2.0的總量關系如下：每1mg G2.0中加入上述甲醇0.4ml；然后在氮氣保護下逐滴加入丙烯酸甲酯，丙烯酸甲酯的加入量與G2.0的總量關系如下：每1mg G2.0中加入上述丙烯酸甲酯0.1ml；在45℃下連續(xù)反應8h后，濾出G2.5，按照G0.5的洗滌方法純化樣品，置于50℃真空干燥箱干燥備用；

9)稱取步驟8)制得備用的G2.5，加入色譜級甲醇溶劑浸泡12h，甲醇的加入量與G2.5的總量關系如下：每1mg G2.5中加入上述甲醇0.5ml；控制反應溫度為20℃，逐滴加入分析純乙二胺：乙二胺的加入量與G2.5的總量關系如下：每1mg G2.5加入乙二胺0.08mL；N₂保護下反應8h；待反應完成后，將反應所得物G3.0濾出，用反應溶劑甲醇沖洗3遍，然后再依次用無水乙醇、蒸餾水反復洗滌3次，置于50℃真空干燥備用。