[發(fā)明專利]一種細(xì)胞保存液

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810033012.2
• 申請日: 2018-01-14
• 公開（公告）號(hào): CN107926933B
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄢和新;楊秋蕊;翟志敏;吳紅平;唐為忠;翟博
• 申請（專利權(quán)）人: 上海慧存醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 上海恒銳佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31286
• 代理人: 黃海霞

本發(fā)明提供一種細(xì)胞保存液，包括以下組分：30?120mM滲透壓穩(wěn)定劑、2?6mM糖類物質(zhì)、0?10mM還原劑、0?120mM電解質(zhì)溶液、25?60mM氨基酸；所述細(xì)胞保存液的滲透壓為310?350mOsm/L。本發(fā)明的細(xì)胞保存液在低溫條件下，能夠有效降低細(xì)胞代謝，減少低溫?fù)p傷，方便了活細(xì)胞在運(yùn)輸過程中的保存，也方便了機(jī)構(gòu)短期保存有功能的活性細(xì)胞。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞保存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種細(xì)胞保存液及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

細(xì)胞是生物體的基本結(jié)構(gòu)單位，細(xì)胞質(zhì)量將影響著身體狀態(tài)。細(xì)胞廣泛應(yīng)用于科研和臨床上，其應(yīng)用的關(guān)鍵是大量供體細(xì)胞的獲得和免疫排斥反應(yīng)的克服，大量供體細(xì)胞的獲得主要靠體外細(xì)胞培養(yǎng)和保存來解決。

目前，細(xì)胞保存還存在一些問題，如運(yùn)輸不便，臨時(shí)儲(chǔ)存不便，運(yùn)輸過程中細(xì)胞活性下降快，細(xì)胞容易積聚成團(tuán)等。細(xì)胞長時(shí)間運(yùn)輸后細(xì)胞的活率很低，細(xì)胞大量死亡，直接影響臨床效果。因此，在臨床醫(yī)療中，如何維持細(xì)胞活性是一項(xiàng)極大的挑戰(zhàn)，在短時(shí)間內(nèi)保存細(xì)胞時(shí)，往往使用生理鹽水或者細(xì)胞培養(yǎng)基來維持細(xì)胞活性，然而細(xì)胞在生理鹽水中活性降低速度非常快，細(xì)胞在培養(yǎng)液中保存效果也不理想，難以高效保存細(xì)胞生物活性。

目前細(xì)胞低溫保存液大多借鑒和采用器官/組織低溫保護(hù)液和灌洗液，例如HTK液、UW液、Collins液等。這些保護(hù)液和灌洗液基礎(chǔ)成分比較簡單，多為1960-1970年代發(fā)明，后來，為適用于不同器官/組織的需要，又經(jīng)過各種改良，可以保存器官10-72小時(shí)。這些改良后的保護(hù)液和灌洗液現(xiàn)在可用于低溫保存細(xì)胞，但是保存細(xì)胞與保存器官/組織的需求不同，細(xì)胞在低溫保存液中容易發(fā)生以下生理改變：缺乏天然細(xì)胞外結(jié)構(gòu)和物質(zhì)，易發(fā)生細(xì)胞膜膨脹；更多環(huán)境壓力造成氧化損傷，生成大量脂質(zhì)過氧化物，細(xì)胞保存液變酸；過多的生長因子和營養(yǎng)提高細(xì)胞基礎(chǔ)代謝率，生成更多的代謝產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物堆積進(jìn)一步有害細(xì)胞活性。這些特點(diǎn)導(dǎo)致低溫保存的細(xì)胞非常容易受到細(xì)胞外環(huán)境影響，例如細(xì)胞保存液的滲透壓、離子濃度、能量底物、抗凋亡和抗壞死物質(zhì)。因此，針對細(xì)胞的低溫生物學(xué)特征，發(fā)明一種優(yōu)化的低溫細(xì)胞保存液是必要的。

專利公開號(hào)為CN104542578B的發(fā)明專利公開了一種細(xì)胞保護(hù)液，該細(xì)胞保存液包括白蛋白、葡萄糖、維生素C和保存基礎(chǔ)液；保存基礎(chǔ)液為復(fù)方電解質(zhì)注射液和復(fù)方氨基酸注射液的混合物。在0～4℃條件下，間充質(zhì)干細(xì)胞和免疫細(xì)胞在該細(xì)胞保存液中保存48h，活力能夠保持在90％以上，形態(tài)也沒有出現(xiàn)變化。但是該保存條件下，細(xì)胞長時(shí)間保存會(huì)使細(xì)胞活性發(fā)生退化，并且不能滿足大規(guī)模保存需求。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種細(xì)胞保存液，有效延長了細(xì)胞保存時(shí)間，提高了保存效果，高效維持活性細(xì)胞的低溫存活。

本發(fā)明的第一方面是提供一種細(xì)胞保存液，包括以下組分：30-120mM滲透壓穩(wěn)定劑、2-6mM糖類物質(zhì)、0-10mM還原劑、0-120mM電解質(zhì)溶液、25-60mM氨基酸；所述細(xì)胞保存液的滲透壓為310-350mOsm/L。

本發(fā)明所述細(xì)胞保存液，其有益效果在于：有效延長了細(xì)胞保存時(shí)間，提高了保存效果。

進(jìn)一步地，所述電解質(zhì)溶液包含：1-20mM Na⁺、20-120mM K⁺、7-15mMMg²⁺、0-0.25mMCa²⁺。所述電解質(zhì)溶液中，鹽離子的濃度模擬細(xì)胞內(nèi)液，采用低濃度Na+、高濃度K⁺、高濃度Mg²⁺、低濃度Ca²⁺，可降低細(xì)胞膜表面離子泵活性，減少酸性物質(zhì)產(chǎn)生。