[發(fā)明專利]一種攜帶熒光Timer基因可變色的重組單純皰疹病毒及制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810028164.3
• 申請(qǐng)日: 2018-01-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110029127A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-07-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王華東;徐富強(qiáng);夏金金;蘇鵬;李穎利;林坤章
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院武漢物理與數(shù)學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;C12N15/66;C12N15/12;C12N7/01;G01N21/64;G01N1/28;G01N1/42;C12R1/93
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

1.一種攜帶熒光Timer基因可變色的重組單純皰疹病毒的重組靶向載體，所述的靶向載體的序列為SEQ ID NO.3所示。

2.權(quán)利要求1所述的靶向載體的制備方法，包括：

（1）以HSV-1 H129病毒基因組DNA為模板，克隆UL37及UL38基因同源臂序列；克隆的UL37及UL38基因同源臂片段分別通過(guò)Hind III、BamH I及BamH I、EcoR I酶切后連入pcDNA3.1+載體，命名為pH129_UL37-38；

UL37基因同源臂序列的擴(kuò)增引物為：UL37-F：5' CCCAAGCTTGTCGGGATCAAACACGGCCACGTCC 3'；UL37-R：5' GGCGGATCCACCGGTTAACAAGGACACTCACGCAAGGCGGAACC3'；

UL38基因同源臂序列的擴(kuò)增引物為：UL38-F：5' GGCGGATCCTGCAGGCGGGTCTTGCTAGGTCGCGATCTGG 3'；UL38-R：5' GGCGAATTCCGGGTCAACGAACAACGAGTGACAG 3'；

（2）以FUGW質(zhì)粒為模板，分別克隆hUbC啟動(dòng)子、WPRE片段；將克隆帶有NheI、Hind III酶切位點(diǎn)的泛素啟動(dòng)子片段和帶有XbaI、ApaI酶切位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)元件WPRE，經(jīng)酶切連入pcDNA3.1(+)載體獲得pcDNA3.1-hUbC-WPRE載體；然后將cmLaRFP基因通過(guò)HindIII、EcoR I酶切位點(diǎn)連到hUbC和WPRE中間，構(gòu)建獲得pcDNA3.1-hUbC-cmLaRFP-WPRE表達(dá)框載體，所述的cmLaRFP基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.2所示；

（3）將cmLaRFP表達(dá)框克隆入靶向載體

設(shè)計(jì)引物從表達(dá)框載體pcDNA3.1-hUbC-cmLaRFP-WPRE中克隆整個(gè)cmLaRFP表達(dá)框片段，引物序列為ULaRFPWPA-F：5' CTGGTTAACGCGCCGGGTTTTGGCGCCTCCCGCGG 3'；ULaRFPWPA-R：5' GTTCCTGCAGGCCATAGAGCCCACCGCATCCCCAGCATG3'，PCR克隆獲得hUbC-cmLaRFP-WPRE-PA表達(dá)框大片段，通過(guò)HpaI和SbfI酶切位點(diǎn)連入載體pH129_UL37-38，經(jīng)酶切、測(cè)序證明靶向載體構(gòu)建成功，命名為pH129_UL37-38-hUbC-cmLaRFP-WPRE-PA。

3.利用權(quán)利要求1所述的靶向載體制備的重組單純皰疹病毒。

4.權(quán)利要求1所述的重組靶向載體或權(quán)利要求3所述的重組單純皰疹病毒的應(yīng)用；所述的應(yīng)用包括：制備時(shí)空維度上的神經(jīng)環(huán)路示蹤病毒、研究病毒感染細(xì)胞過(guò)程、建立重組病毒感染動(dòng)物模型、病毒復(fù)制動(dòng)態(tài)分析或制備篩選抗病毒的藥物制劑。

5.一種攜帶熒光Timer基因可變色的重組單純皰疹病毒的靶向載體，所述的靶向載體通過(guò)將熒光timer基因DsRed1-E5或其變體，或其它來(lái)源的熒光timer基因替換SEQ ID NO.3中的cmLaRFP基因得到，所述的cmLaRFP基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.2所示。

6.利用權(quán)利要求5所述的靶向載體制備的重組單純皰疹病毒。