[發明專利]一種水產養殖用寬譜噬菌體制劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201810024877.2
• 申請日: 2018-01-10
• 公開（公告）號: CN108103031B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 劉莉;盧淑娟;呂孫建;曹錚;林鋒
• 申請（專利權）人: 浙江省淡水水產研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A01N63/40;A01P1/00;C12R1/19
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

本發明涉及水產養殖領域，公開了一種水產養殖用寬譜噬菌體制劑及其制備方法，該噬菌體制劑由保藏號為CGMCC No.9623的噬菌體毒株NTHP01以基因工程大腸桿菌DH5α為宿主菌發酵制備。制備方法：1）將大腸桿菌DH5α添加至培養基中發酵培養，得到宿主菌發酵液；2）將噬菌體和MgCl₂母液投入至宿主菌發酵液中，混勻后靜置，增殖培養，得到發酵混合液；3）將發酵混合液經離心后，得到噬菌體制劑。本發明的寬譜噬菌體制劑對多種水產養殖病原菌均有裂解作用，可單獨或與其他微生態制劑復配使用。且其宿主菌采用基因工程菌，制備方法簡便，使用安全，無副作用，可推廣應用于水產養殖的細菌性病害防治。

技術領域

本發明涉及水產養殖領域，尤其涉及一種水產養殖用寬譜噬菌體制劑及其制備方法。

背景技術

近年來我國水產養殖發展迅速，但病害也逐年嚴重。據不完全統計，目前水產養殖病害多達300余種，每年發生病害的養殖面積約占總養殖面積的1/10，年損失量占養殖總產量的15％～30％，年經濟損失達數百億元，嚴重威脅水產養殖業的可持續發展。

自1928年弗萊明發現青霉素以來，抗生素得到了廣泛的使用和發展，此后人類進入了抗生素的高速發展期。廣義上的抗生素是抑制或消除微生物生長的化學治療劑。由于水產養殖具有細菌感染風險高的特點，出于預防和治療目的，在養殖過程中使用抗生素成為水產行業的普遍做法。Amir Sapkota等人研究發現1990-2007年包括中國在內的等13個水產養殖國家中，使用過土霉素、氯霉素和奧索利酸的國家比例分別占到了92％、69％和69％。抗生素在過去60多年中被廣泛使用，導致細菌耐藥性基因加速擴散，耐藥型細菌種類不斷增加。此外，抗生素濫用還導致了水產品藥物殘留、破壞水體環境、危害有益微生物等一些列嚴重的后果。隨著人們對抗生素及其殘留對水產品安全和環境安全危害性的認識，以及貿易全球化趨勢，我國對水產用抗生素種類及使用進行了嚴格的限制，水產養殖中濫用抗生素現象也已得到了較好的控制。但由于較長時間以來，抗生素在水產養殖中作為病害防治的重要手段，耐藥菌株已普遍存在。據國家鲆鰈類產業技術體系的研究發現，我國鲆鰈類養殖中發現的90多種細菌性病原都存在不同程度的抗生素耐藥性。因此，抗生素的限制使用與耐藥菌株的大量出現，這一矛盾常導致生產上無藥可用的現象發生。無抗生素水產養殖是今后產業發展的一個趨勢。

噬菌體(phage，bacteriophage)是寄生于細菌、霉形體、螺旋體、放線菌以及藍細菌等中的一類病毒，亦稱細菌病毒。其中烈性噬菌體可在敏感菌細胞內增殖并使之裂解，是細菌的“天然殺手”。因此，噬菌體也是細菌性病害的防治途徑之一。與抗生素相比，噬菌體還具有特異性強、副作用小、增殖能力強、不易產生抗性、病原菌依賴性以及使用方便等特點，是一種綠色的生物防治措施。已有的文獻報道發現噬菌體對銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、沙門菌(Salmonella)、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)等細菌均有較好的抑制效果。

由于噬菌體對宿主菌殺菌作用具有特異性，大多數噬菌體對病原菌的防治有一定的局限性，即一種噬菌體只對1種或幾種病原菌有殺菌作用。此外，其特異性也導致噬菌體制劑常以致病菌本身作為宿主菌進行制備，對后期的純化要求較高，且給生產應用帶來潛在的風險。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種水產養殖用寬譜噬菌體制劑及其制備方法。本發明的寬譜噬菌體制劑對多種水產養殖病原菌均有裂解作用，可以單獨或與其他微生態制劑復配使用。且其宿主菌采用基因工程菌，制備方法簡便，使用安全，無副作用，可推廣應用于水產養殖的細菌性病害防治。

本發明的具體技術方案為：一種水產養殖用寬譜噬菌體制劑，由保藏號為CGMCCNo.9623的噬菌體毒株NTHP01以基因工程大腸桿菌DH5α為宿主菌發酵制備。

本發明人在在先專利(201410506817.6，一株中華鱉氣單胞菌噬菌體及其應用)中發現了噬菌體毒株NTHP01后，進行了后續的研究，發現其不僅對氣單胞菌具有裂解作用，而且還具有寬譜性。