[發明專利]一種CPSP動物模型的建立方法及應用

有效

• 申請號: 201810016102.0
• 申請日: 2018-01-08
• 公開（公告）號: CN110013546B
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發明（設計）人: 陳雪梅;王建;李玉萍;臧衛東;王君敏;賈培君;任秀花;邢寅霈;周淑婭;張嘉欣;石小雨;陳丹陽;李文博
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: A61K38/48
• 分類號: A61K38/48;A61K49/00
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 張兵兵

本發明涉及一種CPSP動物模型的建立方法及應用，屬于動物模型構建技術領域。本發明的建立方法包括將0.1?0.3U的VII型膠原酶注射入鼠腦的右側丘腦腹后外側核區，即得。本發明采用經大鼠背側丘腦腹后外側核立體定位注射VII膠原酶建立丘腦痛的模型，通過檢測機械痛、熱痛、冷痛、雙足平衡痛評價中樞神經病理性痛丘腦痛的疼痛特征；采用礦場實驗評價焦慮的情緒反應，強迫游泳和糖水實驗評價抑郁的狀態；免疫熒光和免疫印跡評價神經炎癥反應的發生變化情況；透射電鏡解析超微結構變化，篩選CPSP動物模型并評價立體定位注射VII膠原酶腦出血后丘腦痛的行為學特征及發生發展的神經生物學機制。

技術領域

本發明涉及一種CPSP動物模型的建立方法及應用，屬于動物模型構建技術領域。

背景技術

自發性腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)具有高發病率、高死亡率和高致殘率的特點，占腦卒中的15％～20％，死亡率高達40％。丘腦出血約占腦出血的13％～30％。據報道，至少11-32％的中風患者出現卒中后疼痛(Central post-stroke pain,CPSP)，CPSP的疼痛是腦卒中病人的常見癥狀之一，是最難忍受、最頑固、最難治療的病癥。研究表明CPSP以延髓梗死和丘腦出血比例更高，丘腦腹后核和背核分別占3.2％和25％，丘腦腹后核VPL在中樞痛發揮至關重要的作用。CPSP可能在毫無征兆的情況下發生，自發性疼痛可能會連續或間歇的疼痛，嚴重影響病人生活質量。

因此，丘腦痛是一種發作性、有時呈持續性頑固性疼痛的綜合征，又稱丘腦疼痛綜合征，系丘腦病損綜合征的主要臨床表現之一，屬于中樞痛。CPSP表現為持續或間歇性的燒灼痛、跳痛、酸麻痛、搏擊樣或撕裂樣疼痛、觸摸痛以及痛覺過敏，疼痛發生在受影響側的肢體或軀干，引起疼痛的腦損傷部位50％集中在丘腦，發生率為卒中病人的8％-35％，多發生于卒中后6個月或者更早期階段。疼痛多為自發或者誘發痛，會被各種各樣的刺激所加重如運動、觸摸、溫度的改變(尤其是冷刺激)以及壓力等。臨床研究提示一側丘腦損傷，對側肢體可出現嚴重的慢性疼痛，機械性痛覺過敏，痛覺超敏，冷痛敏表現異常明顯，病人情緒亦會受到影響，表現為焦慮和抑郁等情緒改變。針對中樞痛的臨床治療方法有藥物治療(包括抗抑郁藥，抗癲癇藥，阿片類藥物等)，皮層刺激及深部腦刺激等，但是確切效果并不理想。究其原因可能是目前的藥物對于CPSP并沒有針對性的藥效，而CPSP動物模型的缺乏又使得這些針對性藥物的篩選變得更為困難。

腦卒中后中樞痛在腦卒中患者中的發生率只占8％，但其中50％為丘腦卒中。而且由于腦卒中本身發病率高、基數大，丘腦痛的發病率不可小視，因此迫切需要研究丘腦痛的有效治療方法和手段。但是由于目前對腦出血的機制并不完全清楚，尤其是疼痛的發生及發展的機制研究報道甚少，且目前沒有發現特別有效的治療方案，因此，闡明ICH后CPSP的發病機制、找到新的治療靶點和有效藥物是目前ICH研究的首要目標。

動物模型是研究發病機制和臨床防治的基礎，同時也是研究的一個難點。如何建立一種簡單、快捷且重復性好又與人類腦出血接近的中重度腦出血模型是出血性腦血管疾病研究的一個重要課題。目前常用的腦出血動物模型有：膠原酶誘導法、自體血注入法、微球囊充脹法和自發性腦出血。自體血注入法會出現血液沿針道反流、血腫破入腦室或溢到硬膜下，同時存在血腫形態不一的缺陷。通過膠原酶誘導制作腦出血模型方法簡單、快捷且重復性好，而且與人類腦出血病理、生化和病理生理學有許多相似之處。

膠原酶是一種金屬酶，能破壞組織中血管基底膜及細胞間基質中的膠原蛋白，使血管壁受損引起血液外滲。《VII型膠原酶誘導大鼠腦出血模型研究》(倪厚杰等，神經損傷與功能重建2012，7(6)：411-412)中公開了一種VII型膠原酶誘導的腦出血模型，獲得成功，但該模型神經行為學受到影響，與臨床上CPSP的癥狀并不相同，不能用于研究CPSP的發病機制及篩選有效藥物，目前尚未出現較好的構建CPSP動物模型的方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種CPSP動物模型的建立方法。