[發明專利]一種以大戟烷型三萜為活性成分的川楝子提取物和生物醫藥用途

在審

• 申請號: 201810014090.8
• 申請日: 2018-01-08
• 公開（公告）號: CN107913308A
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發明（設計）人: 陳世偉;賴旭宇
• 申請（專利權）人: 陳世偉
• 主分類號: A61K36/58
• 分類號: A61K36/58;A61P35/00;A61K31/585;A61K31/352
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙)32238
• 代理人: 趙超,張立榮

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，提取物及其制備方法和醫藥用途，具體涉及一種以Meliasenin B、C和D為活性成分的川楝子提取物和生物醫藥用途。

背景技術

Meliasenin B、C和D是從川楝子中分離得到的三種大戟烷型三萜(參考文獻：Limonoids and Triterpenoids from the Stem Bark ofMelia toosendan,J.Nat.Prod.2010,73,664-668)。

目前，沒有關于Meliasenin B、C和D的藥理活性和醫藥用途報道。但是，卻有研究表明川楝子中包括但不局限于Meliasenin B在內的化合物與川楝子的肝毒性相關(參考文獻：川楝子中肝毒性成分的快速篩查研究，中國中藥雜志，2013年6月第38卷第11期)。

項目組在篩選治療肝癌的化合物時發現，Meliasenin B、C和D具有抗肝癌的活性，明確了其分子機制，研究了這三種化合物對正常肝細胞的毒性，并提供了減毒方法(已申請專利)。

但是，Meliasenin B、C和D單體的制備成本相對較高，如果能制備一種以Meliasenin B、C和D為主要成分的提取物，則可以降低入藥成本。

發明內容

本發明的目的在于提供一種以Meliasenin B、C和D為活性成分的川楝子提取物及其制備方法和生物醫藥用途。

本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：

一種以Meliasenin B、C和D為活性成分的川楝子提取物，所述Meliasenin B、C和D的質量百分含量之和不低于75％。

上述川楝子提取物的制備方法，包括如下步驟：

步驟S1，溶劑提取：將川楝子粉碎，50-95％乙醇提取，提取液過濾、濃縮至無醇味；

步驟S2，樹脂富集：將步驟S1所得濃縮液上樣于AB-8大孔吸附樹脂，先用30％乙醇洗脫10-14個柱體積，再用65％乙醇洗脫，收集第7-9個柱體積洗脫液，濃縮至干；

步驟S3，分子垂釣：將步驟S2所得富集產物用垂釣試劑提取，提取液過濾后用3-5倍體積的二氯甲烷提取，靜置、沉淀，收集上清液，濃縮至干即得所述提取物；

其中，所述垂釣試劑為氯化膽堿與氯化鋅按照摩爾比1:3形成的低共熔溶劑。

上述川楝子提取物用作Gli1基因表達抑制劑的生物醫藥用途。

上述川楝子提取物用作Gli2基因表達抑制劑的生物醫藥用途。

上述川楝子提取物用作制備防治肝癌的藥物的生物醫藥用途。

一種藥物組合物，包括上述川楝子提取物，還包括柚皮素。

上述藥物組合物用作Gli1基因表達抑制劑的生物醫藥用途。

上述藥物組合物用作Gli2基因表達抑制劑的生物醫藥用途。

上述藥物組合物用作制備防治肝癌的藥物的生物醫藥用途。

一種藥物制劑，包括上述川楝子提取物，或上述藥物組合物，還包括藥學上可以接受的載體或賦形劑，制成藥學上可以接受的劑型。

本發明的優點：

1、本發明提供的川楝子提取物可以通過抑制Gli1、Gli2基因表達顯著抑制肝癌細胞的增殖，且抑制作用呈現明顯的劑量依賴性，該川楝子提取物為Gli1、Gli2基因的有效抑制劑，可以用于制備防治肝癌的藥物。本領域技術人員知道，抑制Gli1、Gli2基因表達是一種較為成熟的抗癌分子通路，該川楝子提取物正是通過這種通路發揮抗肝癌作用。本發明還發現柚皮素可以降低本發明川楝子提取物對人正常肝細胞的毒性，但不影響其對肝癌細胞的毒性。

2、本發明提供的用于制備上述川楝子提取物的方法無需使用硅膠柱層析，每一步都適合工業化生產，實施性強。

附圖說明

圖1為實施例1中步驟S1所得提取液的HPLC色譜圖；

圖2為實施例1中步驟S2所得洗脫液的HPLC色譜圖；

圖3為實施例1中步驟S3所得提取物的HPLC色譜圖；

圖4為川楝子提取物低、中、高劑量對HepG2細胞的增殖抑制率；

圖5為各給藥組HepG2細胞中Gli1mRNA、Gli2mRNA的相對表達量；

圖6為各給藥組HepG2細胞中Gli1蛋白、Gli2蛋白的相對表達量；

圖7為川楝子提取物低、中、高劑量對SMMC-7721細胞的增殖抑制率；

圖8為各給藥組SMMC-7721細胞中Gli1mRNA、Gli2mRNA的相對表達量；