[發(fā)明專利]原發(fā)性膽汁性肝硬化的診斷試劑盒及相關(guān)基因在制備該試劑盒中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810011509.4
• 申請(qǐng)日: 2018-01-05
• 公開（公告）號(hào): CN108531570B
• 公開（公告）日: 2022-12-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李璇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京康潤(rùn)誠(chéng)業(yè)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883
• 代理公司: 北京虹澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 16008
• 代理人: 蔣尊龍

本發(fā)明提供了一種用于診斷原發(fā)性膽汁性肝硬化的基因標(biāo)志物及其試劑盒，利用所述基因標(biāo)志物可以快速、有效的診斷原發(fā)性膽汁性肝硬化。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于疾病研究領(lǐng)域，具體涉及原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)的診斷標(biāo)志物及其試劑盒的開發(fā)。

背景技術(shù)

原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)又名原發(fā)性膽汁膽管炎，是一種慢性肝內(nèi)膽汁淤積性疾病。患者肝內(nèi)匯管區(qū)大量CD4⁺和CD8⁺為主自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，導(dǎo)致非化膿性膽管炎，伴隨外周血清中出現(xiàn)高滴度抗線粒體抗體(AMA)、膽汁淤積相關(guān)的生化指標(biāo)升高，并有外周血淋巴細(xì)胞亞群和多種細(xì)胞因子的變化，因而免疫系統(tǒng)異常在PBC發(fā)病中具有重要作用，但其機(jī)制尚不完全清楚。我國(guó)報(bào)道的PBC病例數(shù)呈不斷上升趨勢(shì)，但尚缺乏系統(tǒng)的流行病學(xué)調(diào)查。上海、廣州及貴州學(xué)者在當(dāng)?shù)亟】刁w檢人群中通過(guò)篩查AMA的M2亞型(AMA—M2)及進(jìn)一步檢查，推算出PBC在人群中的患病率為49.2/10萬(wàn)～99.78/10萬(wàn)。這些報(bào)道提示，我國(guó)PBC的患病率并不低于國(guó)外，需要引起重視。

PBC的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。目前認(rèn)為遺傳背景和環(huán)境因素相互作用導(dǎo)致了免疫耐受喪失，從而啟動(dòng)了針對(duì)肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的自身免疫反應(yīng)。PBC的遺傳易感性研究在歐洲及北美地區(qū)顯示出較高的一致性，而在亞洲包括日本和中國(guó)進(jìn)行的研究一致性不高。這說(shuō)明PBC的發(fā)病可能存在種族差異，也可能與地域環(huán)境因素的不同有關(guān)，提示需進(jìn)一步探討遺傳與環(huán)境因素相互作用在本病發(fā)生發(fā)展中的意義。近，我國(guó)學(xué)者對(duì)南方(主要是上海和江蘇)漢族PBC患者進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)早前歐美及日本報(bào)道的14個(gè)與PBC相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)中，有7個(gè)與中國(guó)PBC患者相關(guān)。這些資料提示，我國(guó)PBC患者的遺傳易感性與歐美及日本既存在共性，也存在差異。

早期診斷和治療是控制PBC疾病發(fā)展的最有效手段。目前對(duì)PBC的治療缺少有效的辦法，熊去氧膽酸是唯一對(duì)早期PBC患者(尤其是黃疸沒(méi)有出現(xiàn)的患者)進(jìn)行有效控制的藥物，但無(wú)治愈作用，而挽救晚期PBC患者的唯一手段是實(shí)施肝臟移植。我國(guó)是病毒性肝炎高發(fā)的國(guó)家，PBC的臨床癥狀與病毒性肝炎相似，PBC患者早期常被誤診為病毒性肝炎或藥物性肝炎，嚴(yán)重影響了PBC患者的診療。因此，對(duì)PBC患者進(jìn)行早期的有效診斷，具有重要的社會(huì)意義。

我們利用高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序篩選與PBC密切相關(guān)的基因，不僅有利于研究PBC的發(fā)生和發(fā)展的病理機(jī)制，而且能為診斷和治療PBC提供新的診斷標(biāo)志物或新的藥物靶點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種可用于PBC疾病診療的標(biāo)志物基因。相比傳統(tǒng)的PBC疾病的診斷和治療方法，使用基因標(biāo)志物來(lái)診斷和治療PBC疾病具有及時(shí)性、特異性和無(wú)創(chuàng)性。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

提供一種診斷原發(fā)性膽汁性肝硬化的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含通過(guò)檢測(cè)受試者外周血中PELI2基因、ZNF264基因和CDK15基因的表達(dá)水平來(lái)判斷受試者是否患有原發(fā)性膽汁性肝硬化的試劑。

優(yōu)選地，所述試劑包括用RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR或基因芯片診斷原發(fā)性膽汁性肝硬化的試劑。

所述用于RT-PCR或?qū)崟r(shí)定量PCR的試劑為如下引物：

PELI2：正向引物為5’-CACTGCGCCCCCAATAAGG-3’(SEQ ID NO：1)；

反向引物為5’-GTTCTCCAGAGGAGAGTGGC-3’(SEQ ID NO：2)；

ZNF264：正向引物為5’-AGTCATGGTTCTCTGGTGGTTT-3’(SEQ ID NO：3)；

反向引物為5’-GAAGCCCTCCTGTAGCTGTC-3’(SEQ ID NO：4)；