[發明專利]一種快速測定煙草及煙草制品中葡萄糖含量的灰度分析法

在審

• 申請號: 202011437205.8
• 申請日: 2020-12-07
• 公開（公告）號: CN112557385A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 彭麗娟;李苓;劉宇晨;孫浩巍;王春瓊;陳丹;曾爾慶;張慶剛
• 申請（專利權）人: 云南省煙草質量監督檢測站
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 昆明協立知識產權代理事務所(普通合伙) 53108
• 代理人: 謝嘉

本發明公開了一種快速測定煙草及煙草制品中葡萄糖含量的灰度分析法。包括樣品前處理、標準工作曲線繪制、樣品分析和結果計算。煙草或煙草制品中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下生成葡萄糖酸和過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶的作用下，將還原性的4?氨基安替比林與酚偶聯縮合成有紫外吸收的醌類化合物，再利用Image軟件依據樣品溶液的灰度值比值與溶液葡萄糖含量的定量關系即可推算出樣品中的葡萄糖含量。該方法專一性強、操作簡便快速、分析效率高、準確度和精密度高、穩定性好，能夠滿足對煙草和煙草制品中的葡萄糖含量進行大批量、快速、準確檢測的需要，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬于煙草成分檢測技術領域，具體是涉及一種運用灰度分析技術并基于酶促反應對煙草及煙草制品中的葡萄糖含量進行快速準確測定的方法。

背景技術

煙草中的水溶性糖主要為葡萄糖、果糖、蔗糖，是煙草內重要的碳水化合物，在煙草燃吸過程中能調整適度的酸堿平衡，使吃味醇和，增加煙氣的和順性，與煙草品質密切相關。目前煙草行業常用芒森·沃克法(即費林試劑法)和連續流動分析法測定煙草中水溶性的還原糖和總糖，但這些方法測定的都是總量，不能測定單個成分的含量。隨著煙草分析技術發展，對糖的分析也不應僅局限于糖類總量的分析，應深入了解各種單糖的含量及其對煙草品質的影響，因此對煙草及煙草制品中葡萄糖等單糖的測定顯得愈來愈重要。

目前，對煙草中葡萄糖的測定主要采用離子色譜法、近紅外光譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法和毛細管電泳法等，但離子色譜法儀器昂貴，維護費用高，且操作繁瑣；近紅外光譜法必需先建立模型，不能直接用于檢測；氣相色譜法、高效液相色譜法需衍生化，操作較麻煩，需用固相萃取柱預分離等；毛細管電泳法也需要對糖衍生化或使糖帶電，才能進行分離檢測。煙草檢測技術人員正努力尋找一種更加簡便、快速和準確的葡萄糖含量測定方法。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種運用灰度分析技術并結合酶促反應實現的，能夠快速、簡便、準確測定煙草及煙草制品中葡萄糖含量的方法。

本發明的目的通過以下技術方案予以實現。

除非另有說明，本發明所采用的百分數均為質量百分數。

一種快速測定煙草及煙草制品中葡萄糖含量的方法，包括以下步驟：

(1)樣品前處理

按照“YC/T31-1996煙草及煙草制品試樣的制備和水份測定烘箱法”，將煙草或煙草制品置于烘箱中，40℃烘干至可用手指捻碎，取出用粉碎機研磨過40目篩后得到煙末樣品，并測定其含水率；取0.1g煙末樣品置于三角瓶中，加入20mL水振蕩萃取30min后過濾，濾液作為待測樣品溶液備用；

(2)繪制標準工作曲線

配制濃度為50.00mmol/L的葡萄糖儲備液，然后分別稀釋成濃度為4.0、3.5、3.0、2.5、2.0、1.5、1.0、0.5、0.1mmol/L的葡萄糖標液，移取各濃度的葡萄糖標液100μL分別置于2mL微量離心管中，在每個離心管中分別加入葡萄糖氧化酶-過氧化物酶試劑盒中的試劑R₁和R₂各450μL混勻，于37℃水浴顯色10min后，得到對應葡萄糖濃度分別為4.00、3.50、3.00、2.50、2.00、1.50、1.00、0.50、0.10和0.00mmol/L的標準工作液，拍照后用Image軟件轉化并測定灰度值，以0.00mmol/L標準工作液的灰度值為1，分別計算各標準工作液的灰度值比值，然后以標準工作液的葡萄糖濃度的對數為橫坐標，灰度值比值為縱坐標繪制標準工作曲線，線性回歸方程為：Y＝0.4465x+0.5471，相關系數r²＝0.9911；

(3)樣品分析