[發明專利]酸性α-葡萄糖苷酶變體及其用途

在審

• 申請號: 201780055024.9
• 申請日: 2017-09-12
• 公開（公告）號: CN110050063A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: 費德里克·敏果茲;基斯配·羅茲提
• 申請（專利權）人: 吉尼松公司;法國國家衛生及研究醫學協會;埃夫里-瓦爾德艾松大學
• 主分類號: C12N9/26
• 分類號: C12N9/26
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 金海霞;楊青

1.一種截短的GAA多肽，其包含從親本GAA多肽的N-端末端缺失至少一個氨基酸，其中所述親本多肽對應于不含信號肽的GAA多肽的前體形式，

其中所述截短的GAA多肽與所述親本GAA多肽相比在其N-端末端處缺失了1至75個連續氨基酸，并且

其中所述截短的GAA多肽還包含融合到其N-端末端的信號肽。

2.權利要求1的截短的GAA多肽，其中所述截短的GAA多肽與所述親本GAA多肽相比在其N-端末端處缺失了1至75個連續氨基酸，特別是與親本GAA多肽相比在其N-端末端處缺失了6、7、8、9、10、40、41、42、43、44、45或46個連續氨基酸，甚至更特別地與親本GAA多肽相比在其N-端末端處截短了8、42或43個連續氨基酸。

3.權利要求1或2的截短的GAA多肽，其中所述親本多肽是人類GAA(hGAA)，特別是具有在SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：33中、特別是SEQ ID NO：1中示出的氨基酸序列的hGAA，或者是作為具有在SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：33中、特別是SEQ ID NO：1中示出的氨基酸序列的hGAA的功能性變體的hGAA。

4.權利要求1至3任一項的截短的GAA多肽，其中所述截短的GAA多肽具有在SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：34或SEQ ID NO：35中示出的氨基酸序列。

5.權利要求1至4任一項的截短的GAA多肽，其中所述融合的信號肽選自SEQ ID NO：3至7，特別是SEQ ID NO：3的信號肽。

6.一種核酸分子，其編碼權利要求1至5任一項的截短的GAA多肽，所述核酸分子特別是被優化以在體內提高所述截短的GAA多肽的表達和/或提高對所述截短的GAA多肽的免疫耐受性的核苷酸序列，例如在SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50或SEQ ID NO：51中示出的核酸序列。

7.一種核酸構建物，其包含權利要求6的核酸分子，所述核酸構建物包含可操作連接到啟動子、特別是作為肝特異性啟動子的啟動子的所述核酸分子，所述肝特異性啟動子優選地選自α-1抗胰蛋白酶啟動子(hAAT)、甲狀腺素運載蛋白啟動子、白蛋白啟動子和甲狀腺素結合性球蛋白(TBG)啟動子，其中所述核酸構建物任選地還包含內含子，特別是選自人類β球蛋白b2(或HBB2)內含子、FIX內含子、雞β-球蛋白內含子和SV40內含子的內含子，其中所述內含子任選地是修飾的內含子，例如SEQ ID NO：17的修飾的HBB2內含子、SEQ ID NO：19的修飾的FIX內含子或SEQ ID NO：21的修飾的雞β-球蛋白內含子。

8.權利要求7的核酸構建物，其優選地以下述順序包含：增強子；內含子；啟動子，特別是肝特異性啟動子；編碼所述GAA蛋白的核酸序列；以及多腺苷化信號，所述構建物優選地以下述順序包含：ApoE控制區；HBB2內含子，特別是修飾的HBB2內含子；hAAT啟動子；編碼所述截短的GAA多肽的核酸序列；以及牛生長激素多腺苷化信號，所述核酸構建物更特別地包含SEQ ID NO：22至26任一者的核苷酸序列。

9.一種載體，其包含權利要求6至8任一項的核酸分子或核酸構建物，所述載體是病毒載體，優選為反轉錄病毒載體例如慢病毒載體，或AAV載體。