[發明專利]牛生殖細胞的冷凍保存用組合物和冷凍保存方法

有效

• 申請號: 201780051137.1
• 申請日: 2017-08-22
• 公開（公告）號: CN109688812B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 窪田力;安藤貴朗;玄丞烋;玄優基;今村修二;月精悟
• 申請（專利權）人: 博傲沃德株式會社
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;C12N5/073;C12N5/076
• 代理公司: 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙) 11387
• 代理人: 劉春成;劉春燕

1.一種牛精子的冷凍保存液，為用于使牛精子懸浮并冷凍的牛精子的冷凍保存液，其特征在于，包含：

0.3～0.9w/w％的防凍聚氨基酸，包含由下式(I)所示的結構單元以及由下式(II)所示的結構單元，并且由下式(II)所示的結構單元的比例為50～99mol％；以及

2～4w/w％的甘油，

2.根據權利要求1所述的牛精子的冷凍保存液，其特征在于，

所述冷凍保存液為將防凍聚氨基酸和甘油添加到Dulbecco改良培養基(DMEM)、Eagle的MEM培養基(MEM)、其他的細胞用培養液或者其他的生理溶液中，同時調整pH范圍為7.0～8.0，進而添加源自牛精液的液體以使所述源自牛精液的液體為5～20w/w％的水溶液。

3.一種牛精子的冷凍保存方法，其特征在于，包括：

通過添加了包含由下式(I)所示的結構單元和由下式(II)所示的結構單元并且由下式(II)所示的結構單元的比例為50～99mol％的防凍聚氨基酸和甘油的生理溶液，將牛的精液稀釋至5～20倍，使牛精子懸浮在包含0.3～0.9w/w％的防凍聚氨基酸、2～4w/w％的甘油以及源自于牛的精液的一部分的冷凍保存液中的稀釋工序；

使牛精子懸浮的冷凍保存液冷凍在管狀的容器中的工序；以及

之后保持在-60℃以下的溫度進行保存的工序，

4.根據權利要求3所述的牛精子的冷凍保存方法，其特征在于，

所述稀釋工序包括：

用生理溶液將牛的精液稀釋至2.5～10倍，并保持在2～8℃的第一稀釋工序；以及

保持在2～8℃的同時，通過點滴將添加了防凍聚氨基酸和甘油的生理溶液添加到通過第一稀釋工序而獲得的懸浮液中，進一步稀釋將牛的精液稀釋至5～20倍的第二稀釋工序。

5.根據權利要求3或4所述的牛精子的冷凍保存方法，其特征在于，使用直徑為5mm以下的冷凍保存用吸管，冷卻至-140℃以下。

6.根據權利要求3或4所述的牛精子的冷凍保存方法，其特征在于，在冷凍融解6小時后，運動精子率能夠為30％以上，快速前向運動率為10％以上。