[發明專利]一種‘鳳丹’牡丹幼胚離體再生及遺傳轉化體系的建立方法在審
| 申請號： | 202010776698.1 | 申請日： | 2020-08-05 |
| 公開（公告）號： | CN113170729A | 公開（公告）日： | 2021-07-27 |
| 發明（設計）人： | 張濤;張小梅;李圓圓 | 申請（專利權）人： | 重慶師范大學 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385 | 代理人： | 李正 |
| 地址： | 400000 *** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 鳳丹 牡丹 幼胚離體 再生 遺傳 轉化 體系 建立 方法 | ||
1.一種‘鳳丹’牡丹幼胚離體再生的建立方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)‘鳳丹’牡丹幼胚接種于幼胚萌發培養基上萌發培養，得萌發幼胚；
所述幼胚萌發培養基以1/2MS為基礎培養基，還包括以下含量的組分：27～33g/L葡萄糖、14～18g/L瓊脂濃度、2.8～3.2mg/L GA3和0.23～0.27mg/LNAA，pH值為5.8～6.0；
2)將所述萌發幼胚接種至幼胚生根培養基上進行光照培養，得到‘鳳丹’牡丹植株；
所述幼胚生根培養基以1/2MS為基礎培養基，還包括以下含量的組分：0.45～0.55mg/LGA3、0.45～0.55mg/L IBA和0.09～0.11mg/L活性炭。
2.根據權利要求1所述建立方法，其特征在于，所述幼胚萌發培養基還包括以下含量的組分：30g/L葡萄糖、16g/L瓊脂濃度、3.0mg/L GA3和0.25mg/LNAA，pH值為5.8。
3.根據權利要求1所述建立方法，其特征在于，所述萌發培養的溫度為20～25℃，所述萌發培養的時間為25～32d。
4.根據權利要求1所述建立方法，其特征在于，所述幼胚生根培養基還包括以下含量的組分：0.5mg/L GA3、0.5mg/L IBA和0.1mg/L活性炭。
5.根據權利要求1所述建立方法，其特征在于，所述光照培養的溫度20～25℃，所述光照培養的時間為28～32d，所述光照培養的光強為6000～8000Lx。
6.根據權利要求1～5所述建立方法，其特征在于，所述‘鳳丹’牡丹幼胚來自當年開花后90d種子。
7.一種‘鳳丹’牡丹幼胚遺傳轉化體系的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
A.將含目標基因的植物表達載體轉化農桿菌中，依次經篩選培養和擴大培養后，收集菌體，用含有乙酰丁香酮的MS液體培養基懸浮所述菌體，得到農桿菌侵染液；
所述含有乙酰丁香酮的MS液體培養基中乙酰丁香酮的終濃度為250～350μmol/L；
B.以幼胚萌發培養基上培養7～8d的幼胚為材料，用所述農桿菌侵染液侵染所述幼胚8～12min，將侵染后的幼胚在共培養培養基上共培養3～5d，得到共培養幼胚；
所述幼胚萌發培養基以1/2MS為基礎培養基，還包括以下含量的組分：27～33g/L葡萄糖、14～18g/L瓊脂濃度、2.8～3.2mg/L GA3和0.23～0.27mg/LNAA，pH值為5.8～6.0；
C.將所述共培養幼胚在篩選培養基經篩選培養，得到‘鳳丹’牡丹幼胚遺傳轉化體系。
8.根據權利要求7所述方法，其特征在于，步驟A中所述含有乙酰丁香酮的MS液體培養基中乙酰丁香酮的終濃度為300μmol/L；
步驟B中所述侵染的時間為10min；所述共培養的時間為4d。
9.根據權利要求7所述方法，其特征在于，步驟C中所述篩選培養基是以所述幼胚萌發培養基為基礎培養基，還包含終濃度為40～60mg/L的潮霉素。
10.根據權利要求7～9任意一項所述方法，其特征在于，步驟B中共培養培養基為所述幼胚萌發培養基。
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