[發(fā)明專(zhuān)利]脂蛋白輸出信號(hào)及其用途在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201780047254.0 | 申請(qǐng)日： | 2017-08-11 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN109843908A | 公開(kāi)（公告）日： | 2019-06-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 弗雷德里克·安德烈·勞貝爾;弗朗切斯科·倫齊;蓋伊·理查德·科內(nèi)利斯 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 那慕爾大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C07K14/195 | 分類(lèi)號(hào)： | C07K14/195 |
| 代理公司： | 中科專(zhuān)利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021 | 代理人： | 張國(guó)梁;張瑩 |
| 地址： | 比利時(shí)*** | 國(guó)省代碼： | 比利時(shí);BE |
| 權(quán)利要求書(shū)： | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū)： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 多肽前體 輸出信號(hào) 脂蛋白 多肽 核酸 重組表達(dá)載體 重組宿主細(xì)胞 申請(qǐng) | ||
1.一種多肽前體，其包含
(a)革蘭氏陰性細(xì)菌的脂蛋白的N-末端信號(hào)肽，其包含位于所述信號(hào)肽的C-末端的最末端的脂盒基序，其中所述脂盒基序由氨基酸序列L(S/A)(A/G)C組成并且可被II型信號(hào)肽酶特異性識(shí)別；
(b)脂蛋白輸出信號(hào)，其包含根據(jù)以下共有序列中的任一個(gè)的氨基酸序列：
-XJZZ，其中X可以是任何氨基酸，其中J選自由K和A組成的組，其中Z選自由D和E組成的組，條件是當(dāng)J是A時(shí)，X是Q；
-BZZUZ，其中B選自由S和T組成的組，其中Z選自由D和E組成的組，并且其中U選自由D、E和F組成的組；或者
-XKEOEE，其中X和O可以是任何氨基酸，優(yōu)選其中O是V；
其中所述脂蛋白輸出信號(hào)是總體上帶負(fù)電的，并且其中所述脂蛋白輸出信號(hào)位于直接鄰接于所述信號(hào)肽的C-末端；
(c)多肽，其中所述多肽位于所述信號(hào)肽和所述脂蛋白輸出信號(hào)的C-末端；以及
(d)任選地，蛋白酶切割位點(diǎn)基序，其中所述蛋白酶切割位點(diǎn)基序不同于所述脂盒基序并且位于所述信號(hào)肽和所述脂蛋白輸出信號(hào)的C-末端以及所述多肽的N-末端；
其中所述信號(hào)肽、所述脂蛋白輸出信號(hào)和所述多肽不天然共同存在于多肽序列中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽前體，其中革蘭氏陰性細(xì)菌的脂蛋白的所述N-末端信號(hào)肽是狗咬二氧化碳嗜纖維菌5(C.canimorsus 5)的唾液酸酶(siaC)或粘蛋白酶(MucG)的信號(hào)肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多肽前體，其中所述脂蛋白輸出信號(hào)選自根據(jù)以下的氨基酸序列
-SEQ ID NO：16至SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：40至47中的任一個(gè)；
-SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：25至39中的任一個(gè)；或
-SEQ ID NO：49至SEQ ID NO：51或SEQ ID NO：63中的任一個(gè)。
4.一種核酸，其編碼根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多肽前體。
5.一種重組表達(dá)載體，其包含根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸、啟動(dòng)子和轉(zhuǎn)錄和翻譯終止信號(hào)，以及任選的選擇標(biāo)記。
6.一種重組表達(dá)載體，其包含
(a)編碼革蘭氏陰性細(xì)菌的脂蛋白的信號(hào)肽的核酸序列，其中所述信號(hào)肽包含位于所述信號(hào)肽的C-末端的最末端的脂盒基序，其中所述脂盒基序由氨基酸序列L(S/A)(A/G)C組成并且被II型信號(hào)肽酶特異性識(shí)別；
(b)編碼脂蛋白輸出信號(hào)的核酸序列，所述脂蛋白輸出信號(hào)具有根據(jù)以下共有序列中的任一個(gè)的氨基酸序列：
-XJZZ，其中X可以是任何氨基酸，其中J選自由K和A組成的組，其中Z選自由D和E組成的組；條件是當(dāng)J是A時(shí)，X是Q；
-BZZUZ，其中B選自由S和T組成的組，其中Z選自由D和E組成的組，并且其中U選自由D、E和F組成的組；或者
-XKEOEE，其中X和O可以是任何氨基酸，優(yōu)選其中O是V；
其中所述脂蛋白輸出信號(hào)是總體上帶負(fù)電的，并且其中編碼所述脂蛋白輸出信號(hào)的所述核酸序列直接位于編碼所述信號(hào)肽的所述核酸序列的下游；
(c)任選地，編碼蛋白酶切割位點(diǎn)基序的核酸序列，其中所述蛋白酶切割位點(diǎn)基序不同于所述脂盒基序并且位于編碼所述脂蛋白輸出信號(hào)的所述核酸序列和編碼所述信號(hào)肽的所述核酸序列的下游；以及
(d)多克隆位點(diǎn)，其中所述多克隆位點(diǎn)位于編碼所述脂蛋白輸出信號(hào)的所述核酸和編碼所述信號(hào)肽的所述核酸的下游，并且任選地位于所述蛋白酶切割位點(diǎn)基序的下游。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的重組表達(dá)載體，其中革蘭氏陰性細(xì)菌的脂蛋白的所述N-末端信號(hào)肽是狗咬二氧化碳嗜纖維菌5(C.canimorsus 5)的唾液酸酶(siaC)或粘蛋白酶(MucG)的信號(hào)肽。
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