[發(fā)明專利]非人靈長類誘導的多潛能干細胞衍生型肝細胞及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780046803.2
• 申請日: 2017-07-24
• 公開（公告）號: CN109563477A
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發(fā)明（設計）人: E·C·托馬;M·格拉夫;V·亨特
• 申請（專利權(quán)）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 陳迎春;黃革生

1.一種使非人靈長類(NHP)多潛能干細胞分化成NHP肝細胞的方法，所述方法包括步驟：

a)在化學成分確知培養(yǎng)基中以無飼養(yǎng)細胞培養(yǎng)物方式提供NHP多潛能干細胞；

b)使多潛能干細胞與Wnt信號傳導激活物接觸以產(chǎn)生內(nèi)胚層細胞；

c)使內(nèi)胚層細胞與BMP4和成纖維細胞生長因子接觸以產(chǎn)生不成熟的NHP肝細胞；并且

d)使不成熟的NHP肝細胞與HGF、抑瘤素M和地塞米松接觸以產(chǎn)生NHP肝細胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中Wnt信號傳導激活物是CP21。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中任一項所述的方法，其中步驟b)包括使細胞與Ly294002和CP21接觸以誘導分化。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的方法，其中步驟b)包括使細胞與LDN193189接觸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的方法，其中步驟b)包括使細胞與敲除血清替代物(KSR)和DMSO接觸。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其中步驟c)的成纖維細胞生長因子是FGF2或FGF10。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的方法，其中步驟c)包括使細胞與BMP4、DMSO和FGF2或FGF10接觸。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中步驟d)包括使細胞與NOTCH信號傳導抑制劑接觸。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項所述的方法，其中步驟a)的NHP多潛能干細胞是誘導型多潛能干細胞(IPSC)。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的方法，其中NHP多潛能干細胞是衍生自選自食蟹猴(食蟹猴(Macaca fascicularis))和恒河猴(獼猴(Macaca mulatta))的物種。

11.化學成分確知培養(yǎng)基中的無飼養(yǎng)細胞NHP肝細胞培養(yǎng)物。

12.通過根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項所述的方法獲得的NHP肝細胞。

13.NHP肝細胞的生物樣本庫，通過根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項所述的方法獲得。

14.通過根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項所述的方法獲得的NHP肝細胞或根據(jù)權(quán)利要求13所述的生物樣本庫的用途，作為肝臟細胞功能障礙所致疾病的體外模型。

15.通過根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項所述的方法獲得的NHP肝細胞或根據(jù)權(quán)利要求13所述的生物樣本庫的用途，作為肝臟細胞感染的體外模型。

16.用于檢驗化合物潛在毒性的方法，所述方法包括步驟：(i)使根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項所述的方法制備的一個或多個NHP肝細胞暴露于化合物；和(ii)監(jiān)測一個或多個成熟NHP肝細胞的毒性跡象。

17.支持病毒生活周期的體外方法，所述方法包括步驟：使根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項所述方法制備的一個或多個NHP肝細胞暴露于病毒；其中病毒在一個或多個NHP肝細胞內(nèi)部復制。

18.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項所述的任何細胞的用途，用于體外檢驗化合物的毒性。