[發明專利]RNA檢測試劑盒和方法

在審

• 申請號: 201780045231.6
• 申請日: 2017-07-20
• 公開（公告）號: CN109689885A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 李哉勛
• 申請（專利權）人: 海姆生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6827
• 分類號: C12Q1/6827
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;尹玉峰

1.用于檢測RNA分子的試劑盒，其包含：

短逆轉錄引物，其由第一雜交寡核苷酸和第一銜接子寡核苷酸構成，所述第一雜交寡核苷酸由與所述RNA分子的poly(A)尾雜交的寡(dT)構成，并且所述第一銜接子寡核苷酸連接至所述第一雜交寡核苷酸的5’末端并且為不與所述RNA分子雜交的任何核酸序列；

延伸引物，其比所述逆轉錄引物更長并且由第二雜交寡核苷酸和第二銜接子寡核苷酸構成，所述第二雜交寡核苷酸能夠與從所述RNA分子逆轉錄的單鏈cDNA的3’末端部分特異性雜交，該3’末端部分為所述單鏈cDNA的除寡(dT)以外的部分，并且所述第二銜接子寡核苷酸連接至所述第二雜交寡核苷酸的5’末端并且具有不與所述單鏈cDNA雜交的任何核酸序列；以及

正向引物，其具有在所述第二銜接子寡核苷酸序列內的序列。

2.權利要求1所述的試劑盒，其中所述RNA分子是長度為18至180nt的小RNA分子。

3.權利要求2所述的試劑盒，其中所述小RNA分子是tRNA、snRNA、siRNA、exRNA、piRNA、scaRNA或miRNA。

4.權利要求1所述的試劑盒，其中所述第二銜接子寡核苷酸包含取決于待擴增的RNA分子種類的RNA標記寡核苷酸，或者所述RNA標記寡核苷酸和獨立于待擴增的RNA分子種類的具有共有核酸序列的共有寡核苷酸。

5.權利要求1所述的試劑盒，其中所述短逆轉錄引物的長度為29至34nt。

6.權利要求1所述的試劑盒，其中所述第一銜接子寡核苷酸的長度為17至22nt。

7.用于檢測RNA分子的試劑盒，其包含：

用于逆轉錄的短反向引物，其由第一雜交寡核苷酸和第一銜接子寡核苷酸構成，所述第一雜交寡核苷酸由與在所述RNA分子3’末端的5至9nt的所述RNA分子的3’末端部分雜交的核酸序列構成，并且所述第一銜接子寡核苷酸連接至所述第一雜交寡核苷酸的5’末端并且為不與所述RNA分子雜交的任何核酸序列；

延伸引物，其比用于逆轉錄的反向引物更長并且由第二雜交寡核苷酸和第二銜接子寡核苷酸構成，所述第二雜交寡核苷酸能夠與從所述RNA分子逆轉錄的單鏈cDNA的部分特異性雜交，該部分為所述單鏈cDNA的除對應于所述RNA分子的3’末端部分的部分以外的部分，并且所述第二銜接子寡核苷酸連接至所述第二雜交寡核苷酸的5’末端并且具有不與所述單鏈cDNA雜交的任何核酸序列；以及

正向引物，其具有在所述第二銜接子寡核苷酸序列內的序列。

8.權利要求7所述的試劑盒，其中所述RNA分子是長度為18至180nt的小RNA分子。

9.權利要求8所述的試劑盒，其中所述小RNA分子是tRNA、snRNA、siRNA、exRNA、piRNA、scaRNA或miRNA。

10.權利要求7所述的試劑盒，其中所述第二銜接子寡核苷酸包含取決于待擴增的RNA分子種類的RNA標記寡核苷酸，或者所述RNA標記寡核苷酸和獨立于待擴增的RNA分子種類的具有共有核酸序列的共有寡核苷酸。

11.權利要求7所述的試劑盒，其中所述用于逆轉錄的短反向引物的長度為26至28nt，23至28nt，或18至28nt。

12.權利要求7所述的試劑盒，其中所述第一銜接子寡核苷酸的長度為20至22nt，17至22nt，或12至22nt。