[發明專利]用于雙胎輸血綜合征的產前診斷的生物標志物

在審

• 申請號: 201780043521.7
• 申請日: 2017-07-14
• 公開（公告）號: CN109804088A
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發明（設計）人: B·C·卡帕斯立瑪德卡瓦霍;F·阿伯魯戈麥斯德卡瓦霍;C·I·貢卡維斯德奧利維拉;P·J·莫賴斯費雷拉奧利維拉;A·馬提亞斯佩雷拉達庫納寇厚德馬賽多
• 申請（專利權）人: 波爾圖大學;波爾圖大學病理學與分子免疫學學院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 韓威威

雙胎輸血綜合征(TTTS)是這樣的病況，其能夠發生在10％至15％(全世界約150,000例/年)的單絨毛膜雙胎懷孕中。因此，本申請提供了新的基于分子的方法，其允許以快速和非侵入性方式早期篩選該綜合征。使用實時定量PCR，該方法旨在定量母體血漿中HBB(新的TTTS生物標志物)的表達。在具有該病況的懷孕女性中，當與非懷孕女性以及沒有病理學的具有單胎和雙胎懷孕的懷孕女性相比時，該生物標志物顯著減少。該方法，如果應用于具有單絨毛膜雙胎懷孕的所有女性，將允許早期篩選TTTS，有益于母體和胎兒，其可以更快速地利用有效的治療，具有胎兒的存活的可預測的改善。

技術領域

本專利申請涉及檢測適用于所有單絨毛膜雙胎懷孕的雙胎輸血綜合征(TTTS)的新方法。

背景技術

單絨毛膜胎盤的雙胎懷孕具有相對恒定的發生率(～100萬次懷孕/年)，并且不像雙絨毛膜懷孕那樣受遺傳、種族或輔助生殖技術的影響。多胎懷孕中的產前和圍產期發病率和死亡率明顯優于單胎懷孕，然而，根據絨毛膜性，對于母體和胎兒可以發生許多并發癥。

雙胎輸血綜合征(TTTS)是一種嚴重的醫學病況，其發生在10至15％的具有單絨毛膜/雙羊膜胎盤的雙胎懷孕中。TTTS與胎兒和圍產期死亡率的高風險(范圍為60％至100％)以及在約20％至30％的存活胎兒中嚴重的神經學后遺癥的發生相關。診斷方法由懷孕的第2和第3個三個月期的超聲評估組成。然而，TTTS的發病率可能被低估，因為單絨毛膜懷孕中的一些胎兒死亡發生在早期懷孕并且可能是由于未診斷到的TTTS病例。

盡管通過超聲檢查很好地表征，但該綜合征的病因仍然理解較少，并且雙胎之間胎盤吻合的發生似乎是TTTS的病理生理學的關鍵。胎兒之間的血液動力學失衡導致供體雙胎的灌注不足和受體雙胎的過度灌注。因此，所得的臨床表現包括供體雙胎中的血容量不足、生長受限、高心輸出量和羊水過少，以及受體雙胎中的體液超負荷、充血性心力衰竭和羊水過多。當TTTS發生在早期孕齡時，其預后似乎比懷孕晚期更差。胎盤吻合的激光消融，以便將單絨毛膜胎盤轉化為功能性雙絨毛膜胎盤，目前是懷孕的16周和26周之間TTTS最適當的治療方法，并且如果不治療，最可能的結果將是雙胎的死亡。然而，治療性干預減少、但不消除存活胎兒的神經發育中的后遺癥的風險，因為已經患有許多嚴重并發癥時多次診斷到TTTS。簡而言之，使得能夠早期鑒定TTTS的新方法將代表其治療的額外價值，并將導致胎兒死亡率或存活雙胎中的后遺癥的風險降低。

概述

本申請涉及檢測生物樣品中的HBB基因用于早期鑒定雙胎輸血綜合征的方法，其包括以下步驟：

-在第一季度的生物化學篩選時或另一次懷孕時采集母體血液；通過血漿分離和從母體血液提取無細胞RNA(cfRNA)來獲得RNA以進行測試；

-將cfRNA轉化為cDNA；制備用于PCR的組合物，其包含具有序列SEQ ID nr.1至SEQID nr.6的引物和探針，向其中添加待測試的cDNA；

-基于擴增曲線分析結果并定量cDNA樣品中的HBB和18S(內源對照)基因。

在一個實施方案中，進行該方法，直至懷孕的第16周。

在另一個實施方案中，待測試的RNA的樣品獲得自羊水或血漿。

在一個實施方案中，獲得結果，直至在收集樣品后48小時。

一般描述

本申請涉及引物組和探針序列(SEQ ID nr.1至SEQ ID nr.6)，其用于擴增和雜交來自生物樣品的DNA，其被設計為在檢測HBB轉錄物中呈現高特異性。

由于這些轉錄物在TTTS病例中以較低水平存在，因此這些遺傳探針和引物允許開發高度靈敏的方法用于TTTS檢測。