[發明專利]細胞外小泡回收方法及細胞外小泡用容器

有效

• 申請號: 201780032132.4
• 申請日: 2017-05-23
• 公開（公告）號: CN109153882B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 芝清隆;坂元伸行;野田朋澄;山田智
• 申請（專利權）人: 公益財團法人癌研究會;日油株式會社
• 主分類號: A61L31/10
• 分類號: A61L31/10;C09D185/02;C08F230/02;C09D129/04;C09D133/14;C09D139/06;G01N33/543
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 王永紅

本發明開發出一種用于防止以外來體為代表的細胞外小泡向器具的吸附的涂布劑。通過使用含有重均分子量為1萬以上且100萬以下的親水性聚合物、且所得的涂布被膜的接觸角為0度以上且30度以下的涂布劑，可以防止細胞外小泡向器具的吸附。

技術領域

本發明涉及用于有效地回收以外來體(exosome)為代表的來自于細胞的小泡的方法及該回收中所用的容器、器具。另外，涉及用于在利用外來體檢查的方法中使用的基板、流路等。

背景技術

所謂細胞外小泡，是來自于細胞的存在于細胞外的小泡，根據其大小分類為外來體、微泡(微小小胞體，Microvesicle)、凋亡小體(apoptotic body)。在外來體、微泡中，包含蛋白質或mRNA、miRNA等核酸，在凋亡小體中包含被片段化了的核、細胞小器官。在細胞外小泡中，由于在外來體、微泡中包含蛋白質、核酸，因此包含來自于釋放它們的細胞的信息，有可能可以作為生物標記利用。特別是外來體有可能可以在診斷標記、治療中利用，近年來受到關注。

外來體是從細胞中分泌的由脂質雙層膜形成的直徑30～100nm的小泡體。已知從大多數的細胞中分泌外來體，在血液、唾液、尿、母乳等體液中確認了其的存在。在外來體中內包有來自于分泌它們的細胞的RNA、蛋白質，表明有可能通過在體液中循環而將信息傳遞至遠離的細胞(非專利文獻1)。利用來自于癌細胞的外來體中所含的核酸、蛋白質，可顯示出癌的發展得到促進的可能性，此外該情況還表明使用了外來體的癌診斷系統的可能性(非專利文獻2)。

如上所述，已明確內包于外來體中的蛋白質、核酸根據分泌它們的細胞種類而不同。因此，來自于外來體的核酸、蛋白質作為診斷標記而言有用。另外，由于外來體還包含于唾液、尿中，因此如果可以確立使用了外來體的精度高的檢查方法，就可以作為非侵入性診斷方法。此外，還進行過通過使用外來體的信息傳遞功能而將從健康的細胞采集回收的外來體用于受到傷害的細胞、患病細胞的恢復的嘗試(專利文獻1)。

為了從唾液等少量的試樣中純化外來體、或出于治療目的而純化大量的外來體，需要回收率良好地純化的方法。以往作為純化外來體的方法，公開過利用離心分離、色譜柱進行分離的方法(專利文獻2、3)。其中使用了超速離心的離心分離法是經過確立的回收技術，是在外來體的形狀維持性這一點上優異的技術。

例如，如果是從細胞的培養上清液中回收外來體的情況，則可以在將包含外來體的培養基利用低速離心除去細胞的碎片等后，利用2小時左右的超速離心將外來體以顆粒的形式回收。使如此得到的外來體再分散于PBS等緩沖液中，然后進行純化、或者直接用于檢查、研究等分析中。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特表2014－507140號公報

專利文獻2：日本特表2003-531864號公報

專利文獻3：日本特表2002－535665號公報

專利文獻4：日本特開平7－83923號公報

專利文獻5：國際公開第2005/001019號

非專利文獻

非專利文獻1：Valadi，H.等，2007，Nat.Cell Biol.，Vol.9，p.654-659.

非專利文獻2：Skog，J.等，2008，Nat.Cell Biol.，Vol.10，pp.1470-1476.

發明內容

發明所要解決的問題