[發(fā)明專利]抗-CRISPR化合物以及使用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201780029516.0
• 申請(qǐng)日: 2017-03-13
• 公開（公告）號(hào): CN109152848B
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: E·J·松特海默爾;A·戴維森;K·馬克斯韋爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 馬薩諸塞大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;C12N1/20;A61K31/7088;A61P31/00
• 代理公司: 中國貿(mào)促會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 11038
• 代理人: 傅宇昌

1.質(zhì)粒，其包含核酸序列，所述核酸序列編碼：i)從由下列各項(xiàng)組成的組中選擇的II-C型抗-CRISPR(Acr)氨基酸序列的至少一部分：腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseriameningitidis)Acr、裸面小絹猴布拉克氏菌(Brackiella oedipodis)Acr、流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)Acr、米氏西蒙斯氏菌(Simonsiella muelleri)Acr、茄羅爾斯通氏菌(Ralstonia solanacearum)Acr和與腦膜炎奈瑟氏球菌Cas9蛋白具有至少47％同源性的Cas9蛋白相結(jié)合的Acr；ii)抗-CRISPR-相關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)物蛋白；和iii)啟動(dòng)子。

2.權(quán)利要求1的質(zhì)粒，其中所述所編碼的II-C型Acr氨基酸序列的至少一部分進(jìn)一步包含加合物，其選自由下列各項(xiàng)組成的組：核定位序列、親和標(biāo)簽、表位序列標(biāo)簽和DYKDDDDK肽。

3.一種組合物，其包含II-C型腦膜炎奈瑟氏球菌(Nme)Cas9蛋白，以及從由下列各項(xiàng)組成的組中選擇的II-C型抗-CRISPR(Acr)氨基酸序列的至少一部分：腦膜炎奈瑟氏球菌Acr、裸面小絹猴布拉克氏菌Acr、流感嗜血菌Acr、米氏西蒙斯氏菌Acr、茄羅爾斯通氏菌Acr和與腦膜炎奈瑟氏球菌Cas9蛋白具有至少47％同源性的Cas9蛋白相結(jié)合的Acr。

4.權(quán)利要求3的組合物，其中所述II-C型Acr氨基酸序列進(jìn)一步包含加合物，其選自由下列各項(xiàng)組成的組：核定位序列、親和標(biāo)簽、表位序列標(biāo)簽和DYKDDDDK肽。

5.權(quán)利要求3的組合物，其中所述II-C型NmeCas9蛋白為II-C型dNmeCas9蛋白。

6.一種方法，其包括：

a)提供：

i)包含至少一個(gè)可疑基因的生物細(xì)胞；

ii)II-C型腦膜炎奈瑟氏球菌(Nme)Cas9/sgRNA復(fù)合物，

其中所述sgRNA能夠與至少一個(gè)可疑基因的靶位點(diǎn)雜交，并且所述II-C型NmeCas9蛋白包含結(jié)合位點(diǎn)；和

iii)從由下列各項(xiàng)組成的組中選擇的II-C型抗-CRISPR(Acr)氨基酸序列的至少一部分：腦膜炎奈瑟氏球菌Acr、裸面小絹猴布拉克氏菌Acr、流感嗜血菌Acr、米氏西蒙斯氏菌Acr、茄羅爾斯通氏菌Acr和與腦膜炎奈瑟氏球菌Cas9蛋白具有至少47％同源性的Cas9蛋白相結(jié)合的Acr，其以特異性親和力與所述結(jié)合位點(diǎn)相結(jié)合；

b)使所述II-C型NmeCas9/sgRNA復(fù)合物與所述生物細(xì)胞相接觸，從而使得所述II-C型NmeCas9/sgRNA復(fù)合物與所述靶位點(diǎn)雜交；

c)用所述II-C型NmeCas9/sgRNA復(fù)合物編輯所述可疑基因；和

d)使所述結(jié)合位點(diǎn)與所述II-C型抗-CRISPR氨基酸序列的所述至少一部分相接觸，從而使得所述編輯被減少。

7.權(quán)利要求6的方法，其中所述II-C型NmeCas9蛋白為II-C型dNmeCas9蛋白。

8.權(quán)利要求6的方法，其中所述減少的編輯防止NmeCas9結(jié)合的至少一個(gè)脫靶事件。

9.權(quán)利要求8的方法，其中所述至少一個(gè)脫靶事件選自由下列各項(xiàng)組成的組：DNA切割和DNA突變。

10.權(quán)利要求8的方法，其中所述減少的編輯在細(xì)胞周期的G1期期間出現(xiàn)。

11.權(quán)利要求6的方法，其中所述減少的編輯防止嵌合基因型。

12.權(quán)利要求6的方法，其中所述減少的編輯抑制基因驅(qū)動(dòng)。

13.權(quán)利要求6的方法，其中所述減少的編輯選自由下列各項(xiàng)組成的組：至少70％、75％、90％和100％。