[發明專利]轉染植物和減少隨機整合事件的方法

有效

• 申請號: 201780028985.0
• 申請日: 2017-03-23
• 公開（公告）號: CN109196105B
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 馬塞爾·蒂斯特曼;瑪爾杰·范克雷滕;保羅·霍亞卡斯
• 申請（專利權）人: 萊頓大學;萊頓教學醫院
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.在植物細胞中減少轉染的核酸分子的隨機整合的方法，所述方法包括提供植物細胞，其中與野生型植物細胞相比，所述植物細胞中的POLQ表達和/或活性降低，并用核酸分子轉染所述植物細胞。

2.用核酸分子轉染植物細胞的方法，所述方法包括提供植物細胞，其中與野生型植物細胞相比，所述植物細胞中的POLQ表達和/或活性降低，并用核酸分子轉染植物細胞，其中所述核酸分子的隨機整合被減少。

3.在植物細胞中表達RNA分子或多肽的方法，所述方法包括提供植物細胞，其中與野生型植物細胞相比，所述植物細胞中的POLQ表達和/或活性降低，并用編碼所述RNA分子或多肽的核酸分子轉染植物細胞，其中所述核酸分子的隨機整合被減少。

4.產生表達RNA分子或多肽的植物的方法，所述方法包括提供植物細胞，其中與野生型植物細胞相比，所述植物細胞中的POLQ表達和/或活性降低，并用編碼所述RNA分子或多肽的核酸分子轉染植物細胞并由所述植物細胞產生所述植物，其中所述核酸分子的隨機整合被減少。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述核酸分子通過位點特異性基因重組或同源重組整合至植物細胞的染色體中。

6.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述植物細胞包含對由POLQ基因編碼的前mRNA具有特異性的反義寡核苷酸，或對由POLQ基因編碼的mRNA具有特異性的雙鏈RNAi分子。

7.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述植物細胞具有一個或多個突變的POLQ等位基因，使得與野生型基因相比，POLQ表達和/或活性降低至少70％。

8.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述植物細胞不是擬南芥。

9.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中將所述核酸分子瞬時轉染到植物細胞中。

10.根據權利要求9所述的方法，其中所述瞬時轉染的核酸分子編碼核酸酶。

11.根據權利要求9所述的方法，其中所述瞬時轉染的核酸分子編碼CRISPR/Cas系統組分。

12.根據權利要求9所述的方法，其中所述瞬時轉染的核酸分子包含植物表達盒。

13.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中通過使用輻射、化學誘變劑、使用轉座子的隨機整合、定點誘變、同源重組載體或靶向核酸酶來突變一個或多個POLQ等位基因來降低所述植物細胞中的POLQ表達。

14.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中通過向植物細胞提供POLQ抑制性核酸分子來降低所述植物細胞中的POLQ表達。

15.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中通過向植物細胞提供POLQ結合分子來降低所述植物細胞中的POLQ活性。