[發明專利]靶分析物的亞細胞定位

有效

• 申請號: 201780016884.1
• 申請日: 2017-03-16
• 公開（公告）號: CN108780086B
• 公開（公告）日: 2023-09-01
• 發明（設計）人: 喬治·布里坦;謝爾蓋·古爾尼克
• 申請（專利權）人: 貝克曼考爾特公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 上海華誠知識產權代理有限公司 31300
• 代理人: 湯國華

1.一種定量和確定包括來自全血的細胞的樣品中的至少一個分析物的分布的方法，所述方法包括：

用第一透化試劑處理所述細胞的第一等分試樣，所述第一透化試劑包括0.015％和0.125％之間的洋地黃皂苷以使細胞質膜透化但不使核膜透化；

用第二透化試劑處理所述細胞的第二等分試樣，所述第二透化試劑包括0.25％的洋地黃皂苷和0.125％的Triton?X-100中的至少一種以使所述細胞質膜和所述核膜透化；

洗滌所述第一等分試樣和所述第二等分試樣；

用能夠特異性結合到所述分析物的標記試劑染色所述第一等分試樣和所述第二等分試樣；

使用流式細胞儀來測量來自所述第一等分試樣的多個細胞中的所述標記試劑的第一信號和來自所述第二等分試樣的多個細胞中的所述標記試劑的第二信號；以及

比較所述第一信號與所述第二信號以定量和確定所述分析物的分布；

其中所述分析物位于所述全血中所包括的未純化的稀有細胞群中。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述測量步驟包括逐個細胞地測量來自所述第一等分試樣的所述多個細胞的所述第一信號和來自所述第二等分試樣的所述多個細胞的所述第二信號。

3.根據前述權利要求中任一項所述的方法，還包括用第三透化試劑處理所述細胞的第三等分試樣，所述第三透化試劑使所述細胞質膜和細胞器膜透化。

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一透化試劑包括pH為4.5-6.5的1-100mM的MES，0-274mM的NaCl以及0-5.2mM的KCl。

5.根據權利要求4所述的方法，其中所述第一透化試劑包括137mM的NaCl以及2.7mM的KCl。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述第二透化試劑包括pH為4.5-6.5的1-100mM的MES，0-274mM的NaCl以及0-5.2mM的KCl。

7.根據權利要求1所述的方法，其中處理所述細胞的所述第一等分試樣的所述步驟包括用固定劑固定所述細胞。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述固定劑包括1％-10％的多聚甲醛。

9.根據權利要求1所述的方法，其中所述細胞包括單核細胞。

10.根據權利要求1所述的方法，其中所述分析物是蛋白質、染色體、脂質、離子、寡核苷酸、多核苷酸、肽或糖。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述蛋白質是可活化蛋白質。

12.根據權利要求10所述的方法，其中所述蛋白質是組成性地存在于一個區室或另一個區室中的蛋白質。

13.根據權利要求10所述的方法，其中所述蛋白質是在患病或異常樣品中差異表達或活化的蛋白質。

14.根據權利要求11所述的方法，其中所述可活化蛋白質是轉錄因子。

15.根據權利要求11所述的方法，其中所述可活化蛋白質是激酶。

16.根據權利要求11所述的方法，其中所述可活化蛋白質是磷酸酶。

17.根據權利要求11所述的方法，其中所述可活化蛋白質是DNA或RNA結合或修飾蛋白。

18.根據權利要求11所述的方法，其中所述可活化蛋白質是核輸入或輸出受體。

19.根據權利要求11所述的方法，其中所述可活化蛋白質是細胞凋亡或細胞存活的調節因子。