[發明專利]核酸或蛋白實時檢測用單核酸及利用其的檢測方法

在審

• 申請號: 201780011639.1
• 申請日: 2017-02-15
• 公開（公告）號: CN109415757A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 南泳鉉
• 申請（專利權）人: 紐麗生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/533
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 張晶;趙赫

本發明涉及具有X?Y?Z的結構，在單核酸的兩個末端或內部附著可探測的標記物，實時檢測核酸或蛋白的過程中使用為引物及探針的單核酸(promer)及包括利用上述單核酸(promer)而擴增要檢測的核酸之后，測定切斷的片段的量的步驟的實時檢測核酸及蛋白的方法，檢測本發明的核酸或蛋白的方法，使用比起以往檢測方法更少的寡聚物(oligo)，無需用于實時確認的額外的位置的探針(probe)，通過更少的費用和簡單的分析方法，可實時檢測要檢測的核酸或蛋白。并且，通過切斷單核酸(promer)的Y部位之后擴增的步驟，可確認Y部位的突變，并可多重檢測比附著于單核酸的熒光物質的數量更多的核酸或蛋白，因此可有用地利用于多種疾病的診斷及預后診斷。

技術領域

本發明涉及為了實時檢測核酸或蛋白而同時可使用為引物及探針的單核酸(promer)及利用上述單核酸(promer)實時檢測核酸或蛋白的方法。

背景技術

實時檢測核酸或蛋白的方法，如本領域公知的內容所述，廣泛使用微陳列(microaray)、反轉錄聚合酶鏈式反應(Real-time polymer ase chain reaction，RT-PCR；Quantitative real-time polylmerase chai n reaction，qRT-PCR)檢查法、NASBA、RCA、TDMA等的等溫擴增方法。

這種核酸或蛋白的檢測方法，為了實時檢測，需要正向/反向引物(primer)和SYBR之類的嵌入型(Intercalator type)的dsDNA-結合劑(dsDNA-binding agents)或探針型(probe type)的Taqman探針(Taqman Probe)、分子信標(Molecular Beacon)、MGB探針(MGBprobe)、Catacleave probe等。這種探測方法具有幾個限制性。作為一例，為了分析miRNA之類的長度短的核酸，在cDNA合成過程中，形成環RT引物(loop RT primer)或聚A(poly A)，需要在聚A后擴大追加的寡核苷酸(oligonucleotide)。這在miRNA之類的長度短的核酸分析中經過復雜的過程，需要提高追加費用和較長的檢測時間。并且，以往方法中，在要檢測的一個miRNA僅可標記熒光物質，目前為了檢測熒光物質而使用的裝備，一下子可同時分析的熒光頻道數量通常被限制為4～7種，因此為了分析8個以上的miRNA，存在需要反復進行2次以上的相同工作的缺點。

作為以往方法中受限的另一例，為了分析靶核酸而擴增的寡核苷酸(oligonucleotide)的長度，考慮正向/反向引物(primer)和探針(p robe)的長度，需要最小60～70bp以上的長度。這種情況下，需要最小3處的特異性序列(specific sequence)。

作為另一例，為了測定單核苷酸多態性(SNP，single nucleotide polymorphism)之類的單一位置的核苷酸(nucleotide)的變異，為了端點基因分型(endpointgenotyping)，利用肽核酸(PNA，pepti de nucleic acid)、鎖核酸(LNA，locked nucleicacid)等之類的技術，增加引物(primer)或探針(probe)的特定變異位置的結合力，這難以制造引物和探針，并需要更多的時間和費用。