[發明專利]具有降低的背景的基于光學的納米孔分析

有效

• 申請號: 201780006777.0
• 申請日: 2017-01-11
• 公開（公告）號: CN108463560B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 丹尼爾·科斯洛夫;布雷特·N·安德森
• 申請（專利權）人: 昆塔波爾公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;G01N21/64;G01N33/487
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 李平;鄭霞

1.一種確定多核苷酸的序列的方法，所述方法包括：

提供納米孔陣列，所述納米孔陣列包含(a)第一側和第二側、(b)固相膜和與其共同延伸的不透明層，以及(c)多個孔眼，所述固相膜分隔所述納米孔陣列的第一側上的第一室和所述納米孔陣列的第二側上的第二室，其中每個孔眼提供所述第一室和所述第二室之間的流體連通并具有信號生成區，且其中所述不透明層基本上防止光穿過所述納米孔陣列；

使多核苷酸從所述第一室易位穿過所述孔眼至所述第二室，其中

(i)每個多核苷酸包含多核苷酸鏈，其中所述多核苷酸鏈的不同種類的核苷酸被生成可區分的熒光信號的不同熒光標記物標記，

(ii)所述孔眼中的每一個限制每條所述多核苷酸鏈的核苷酸以單列移動穿過每個孔眼的所述信號生成區；并且

(iii)每條多核苷酸鏈的熒光標記物互相自猝滅，使得當所述標記物在所述信號生成區以外時，來自激發的互相自猝滅的標記物的熒光信號被猝滅；

當所述多核苷酸鏈易位穿過所述孔眼的所述信號生成區時，用激發光束激發所述多核苷酸鏈的熒光標記物，其中所述激發光束被引導穿過所述第二室至所述納米孔陣列，使得所述不透明層基本上防止激發所述第一室中的光學標記物；

檢測來自所述信號生成區中的所述熒光標記物的熒光信號，以確定所述多核苷酸鏈的特征；和

從在每個孔眼的信號生成區處檢測的熒光信號確定所述多核苷酸鏈的核苷酸的序列。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述不透明層是金屬層。

3.如權利要求2所述的方法，其中所述金屬層是鋁層或金層。

4.如權利要求2所述的方法，其中所述孔眼中的每一個的所述信號生成區從最接近所述第二室的所述金屬層的表面延伸至所述第二室。

5.如權利要求2所述的方法，其中所述激發和檢測的步驟用落射照明系統實施。

6.如權利要求2所述的方法，其中所述納米孔陣列的所述孔眼中的每一個包含固定在其中的蛋白納米孔。

7.如權利要求6所述的方法，其中所述蛋白納米孔中的每一個固定在跨所述孔眼設置的脂雙層中。

8.如權利要求2所述的方法，其中所述熒光標記物是受體標記物，且其中所述激發光束激發所述孔眼的每一個處的供體標記物，所述供體標記物在受體標記物易位穿過所述信號生成區時激發所述受體標記物。