[實(shí)用新型]一種現(xiàn)場(chǎng)可視化核酸等溫?cái)U(kuò)增裝置

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201721811961.6
• 申請(qǐng)日: 2017-12-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN207713748U
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 耿合員;卡布努爾·馬木提;王昌丹;汪圣強(qiáng);陸正清;錢學(xué)銘;易海華;于九洋;孫悅;邢琛;楊志俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 耿合員
• 主分類號(hào): C12M1/38
• 分類號(hào): C12M1/38;C12M1/00;C12Q1/6844
• 代理公司: 無(wú)錫市匯誠(chéng)永信專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32260
• 代理人: 張歡勇

本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)設(shè)備，尤其是一種現(xiàn)場(chǎng)可視化核酸等溫?cái)U(kuò)增裝置，包括離心裝置、恒溫內(nèi)膽、恒溫裝置、窗口裝置、紫外燈裝置和照明裝置；所述離心裝置位于防護(hù)殼體內(nèi)，防護(hù)殼體的頂部裝有防護(hù)蓋；所述恒溫內(nèi)膽位于防護(hù)殼體的外側(cè)，恒溫內(nèi)膽和防護(hù)殼體均位于機(jī)殼內(nèi)，恒溫裝置固定在恒溫內(nèi)膽上，恒溫內(nèi)膽的一側(cè)裝有窗口裝置；所述紫外燈裝置和照明裝置照射恒溫內(nèi)膽。該裝置使整個(gè)檢測(cè)過(guò)程可視化，不僅大大降低了檢測(cè)成本，而且大大縮短了檢測(cè)時(shí)間。該裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、易于制造、成本低廉且操作簡(jiǎn)單、便于攜帶、安全可靠、節(jié)能環(huán)保，非常適合于口岸一線、基層醫(yī)療及疫區(qū)現(xiàn)場(chǎng)的病原快速檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)設(shè)備，尤其是一種現(xiàn)場(chǎng)可視化核酸等溫?cái)U(kuò)增裝置。

背景技術(shù)

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是2000年由日本學(xué)者Notomi等【Notomi T,Okayama H,Masubuchi H,et al. Loop-mediatedisothermal amplification of DNA[J].Nucleic Acids Research,2000, 28(12):E63.】發(fā)明的一種新的核酸擴(kuò)增技術(shù)，該技術(shù)因其檢測(cè)特異性好、靈敏度高、檢測(cè)時(shí)間短且無(wú)需熱循環(huán)設(shè)備已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種病原體基因的檢測(cè)，如流感病毒、諾如病毒、冠狀病毒、結(jié)核桿菌等。

目前，針對(duì)LAMP擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)結(jié)果的判定方法主要有以下三種：

第一種方法：是應(yīng)用濁度的簡(jiǎn)便驗(yàn)證法。LAMP擴(kuò)增反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生一種叫焦磷酸鎂的衍生物，該衍生物與生成的擴(kuò)增產(chǎn)物的量成正比。由于LAMP法能產(chǎn)生大量的擴(kuò)增產(chǎn)物，衍生物的產(chǎn)量也會(huì)大增，于是在離心管中呈現(xiàn)出白色渾濁。因此，待擴(kuò)增結(jié)束后通過(guò)看白色渾濁的有無(wú)，即可驗(yàn)證是否有靶基因的存在。

第二種方法：應(yīng)用熒光目視試劑的簡(jiǎn)便驗(yàn)證法。該方法是在LAMP擴(kuò)增反應(yīng)前加入一種目視熒光試劑如鈣黃綠素(螯合劑)，與試劑中的錳離子結(jié)合處于淬滅狀態(tài)不發(fā)熒光。擴(kuò)增反應(yīng)的副產(chǎn)物焦磷酸離子與錳離子結(jié)合釋放鈣黃綠素，淬滅狀態(tài)接觸，發(fā)出黃綠色熒光。因此，擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后觀察反應(yīng)液顏色的變化即可驗(yàn)證是否有靶基因的存在。

第三種方法：應(yīng)用渾濁度的實(shí)時(shí)檢測(cè)法。LAMP擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)生的白色渾濁物 (焦磷酸鎂)可用吸光光度計(jì)對(duì)渾濁度進(jìn)行實(shí)時(shí)測(cè)定，通過(guò)實(shí)時(shí)觀察濁度曲線的有無(wú)即可驗(yàn)證是否有靶基因的存在，如圖1所示。該濁度檢測(cè)法需要依賴環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)濁度基因檢測(cè)系統(tǒng)，如北京藍(lán)譜生物科技有限公司在售的實(shí)時(shí)濁度檢測(cè)系統(tǒng)LA-500或者實(shí)時(shí)濁度測(cè)定裝置LA-320c 這些濁度檢測(cè)設(shè)備價(jià)格高昂，極大增加了LAMP檢測(cè)的成本，使得該技術(shù)檢測(cè)的推廣普及受到極大限制。

LAMP反應(yīng)的一般過(guò)程：首先將反應(yīng)液配置完成后將離心管經(jīng)過(guò)離心后放入儀器(如LA-320c環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)濁度儀)，在等溫條件下擴(kuò)增35-60min；然后對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定：既可以通過(guò)第一種或第二種方法，即待反應(yīng)結(jié)束后從設(shè)備中取出離心管通過(guò)肉眼觀察離心管內(nèi)綠色熒光或白色沉淀進(jìn)行判斷，也可以通過(guò)第三種方法即通過(guò)實(shí)時(shí)濁度儀上濁度值的上升來(lái)判斷。

缺點(diǎn)及不足之處：

第一種及第二種LAMP檢測(cè)結(jié)果判定方法中，均需要待反應(yīng)結(jié)束后從等溫設(shè)備中取出離心管后才能通過(guò)肉眼觀察白色沉淀或綠色熒光進(jìn)行判定，無(wú)法對(duì)整個(gè)反應(yīng)過(guò)程通過(guò)肉眼觀察實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)的進(jìn)程，因而在對(duì)病原體的檢測(cè)時(shí)間具有不確定性，需要多次預(yù)實(shí)驗(yàn)才能最終確定反應(yīng)時(shí)間。

第三種LAMP檢測(cè)結(jié)果判斷方法中，雖然通過(guò)濁度儀裝置對(duì)整個(gè)反應(yīng)進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，且能通過(guò)濁度曲線的有無(wú)進(jìn)行結(jié)果判定，但是該反應(yīng)依賴價(jià)格高昂的設(shè)備(如實(shí)時(shí)濁度檢測(cè)系統(tǒng)LA-500市場(chǎng)價(jià)在40-50萬(wàn)人民幣)，使得檢測(cè)的成本大大提高，不利于在國(guó)境口岸、基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)及疫區(qū)現(xiàn)場(chǎng)推廣應(yīng)用。