[發明專利]彎曲菌多肽、抗體捕獲器件及試劑盒

有效

• 申請號: 201711500442.2
• 申請日: 2017-12-25
• 公開（公告）號: CN109884291B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 李振軍;陳菲
• 申請（專利權）人: 蘇州和銳生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/543;G01N33/569
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 程曉

本發明公開一種SEQ ID：1所示彎曲菌多肽的核心序列、含核心序列的彎曲菌多肽、抗體捕獲器件、試劑盒及檢測方法，屬于免疫學技術領域。本發明的技術方案是克隆表達含有SEQ ID：1核心序列的彎曲菌多肽，通過固相載體及其上含核心序列的多肽捕獲樣本中的抗體，達到輔助診斷克羅恩病的作用。

技術領域

本發明涉及一種彎曲菌多肽的核心序列，及其包含多肽的抗體捕獲器及試劑盒，屬于免疫學檢測技術領域。

背景技術

炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種自體免疫性腸病，包括潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis,UC)和克羅恩病(Crohn's disease,CD)，近10多年來在我國發病率呈逐步增高趨勢。IBD的臨床表現復雜多樣, 不僅有消化道癥狀, 還可有腸外表現。由于癥狀為腹痛、腹瀉、便血等非特異性腸炎表現，CD與UC，以及IBD與結核性腸炎等其他腸道慢性疾病很難鑒別診斷。血清學指標有助于鑒別CD與UC，以及IBD與非IBD。

IBD的發病機理復雜，其中之一的機制是由于遺傳、環境等因素影響，使腸道粘膜的屏障功能障礙，免疫系統對正常腸道存在的抗原產品免疫反應，表現為體內可檢測到對腸道微生物抗原及代謝物的抗體。通過對這些抗體的檢測，可輔助診斷自體免疫學腸病包括IBD。目前已明確的具有IBD輔助診斷作用的抗微生物抗體包括抗CBirl抗體、抗Fla-X抗體、抗4aFla-2抗體等細菌鞭毛抗體，以及抗熒光假單胞菌I2抗體和抗大腸桿菌外膜孔道蛋白OmpC抗體等。由于微生物基因的易變異性和多態性，新的微生物抗原不斷出現，其中一些參與腸道粘膜的免疫調節。本發明所公布的彎曲菌多肽與現有報道的IBD相關抗原多肽差異顯著，但經過序列分析，發現與彎曲菌多肽自身抗體產生有關的是某些核心序列，含有該核心序列的彎曲菌多肽經臨床確診的患者樣本驗證，具有鑒別健康人與克羅恩病的能力。

發明內容

本發明的第一方面，公布SEQ ID:1所示的彎曲菌多肽及核心序列，連接核心序列之間的氨基酸序列可有多種變異。

所述多肽包含三個核心序列，如SEQ ID:2和SEQ ID:3所示。

一種彎曲菌多肽，其具有如SEQ ID：2或SEQ ID：3所示的多肽序列。

本發明的第二方面，提供一種抗體捕獲器件的制備方法，把所述的彎曲菌多肽直接或間接固定在固相載體上，用于捕獲樣本中的抗彎曲菌抗體。

固相載體包括微孔板、熒光微球、乳膠微球、樹脂微球、磁性微球、薄膜、微孔膜、硝酸纖維素膜等。

一個優選例中，固相載體為微孔板，另一個優選例中為磁性微球，第3個優選例中同時選了熒光微球和硝酸纖維膜，第4個優選例中為膠體金。

多肽固定在固相載體的方法是直接包被或通過載體蛋白間接包被，優選地，載體蛋白為BSA，或者生物素-鏈酶親和素。

一個優選例中，把所述多肽與BSA偶聯，然后再包被在固相載體上。

另一個優選例中，先把多肽與生物素反應，然后把生物素化的多肽與鏈霉親和素偶聯，形成多肽與鏈親合素的復合物，再把復合物包被在固相載體上。

本發明的第三方面，公開前述的抗體捕獲器件在克羅恩病中的應用，本發明所述的應用是基于免疫學反應，對樣本中抗彎曲菌抗體的測定方法，包括如下步驟：

（1）待檢測樣本作用于抗體捕獲器件，使樣本中的抗彎曲菌抗體與抗體捕獲器件上的多肽結合；（2）通過標記物測定樣品中抗彎曲菌多肽抗體的含量。

彎曲菌抗原或抗原表位偶聯物可通過目前任何一種免疫學檢測方法檢測樣本中的抗彎曲菌抗體，比如ELISA、板式化學發光、化學發光、免疫層析、免疫滲濾等等，所對應的標記物分別為辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、吖啶酯、稀土元素和膠體金等。