[發明專利]提升水稻籽粒淀粉品質的方法

在審

• 申請號: 201711499312.1
• 申請日: 2017-12-31
• 公開（公告）號: CN108239655A
• 公開（公告）日: 2018-07-03
• 發明（設計）人: 張國棟;劉佳音;米鐵柱;萬吉麗;王克響;孫偉航
• 申請（專利權）人: 青島袁策生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/10;A01H6/46
• 代理公司: 北京華仁聯合知識產權代理有限公司 11588
• 代理人: 李冰

1.一種提升水稻籽粒淀粉品質的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A.重組載體構建；

B.轉化農桿菌的建立；

C.獲得獨立轉化植株；

D.選擇純合單株；

E.選留的純合單株進行表型選擇。

2.根據權利要求1所述提升水稻籽粒淀粉品質的方法，其特征在于，所述A.重組載體構建，進一步包括：

(1)T4連接酶連接形成重組載體；

(2)重組載體轉化；

(3)挑選連接正確的質粒轉化農桿菌。

3.根據權利要求2所述提升水稻籽粒淀粉品質的方法，其特征在于，所述步驟進一步包括：

(1)將帶谷蛋白GluB-1啟動子Glb的質粒Puc18-Glb酶切，分離回收目的片段，與酶切后的pCAMBIA1300上用T4連接酶連接形成中間載體，再將SBE1基因的cDNA片段酶切，分離回收目標片段，與酶切過中間載體用T4連接酶連接形成重組載體。

4.根據權利要求2所述提升水稻籽粒淀粉品質的方法，其特征在于，所述步驟進一步包括：

(2)將重組載體轉化大腸桿菌感受態DH5α，在抗性培養基上挑選白色單菌落。

5.根據權利要求2所述提升水稻籽粒淀粉品質的方法，其特征在于，所述步驟進一步包括：

(3)將挑選的白色單菌落富集抽提DNA，酶切后電泳檢測，挑選連接正確的質粒轉化農桿菌EHA105。

6.根據權利要求1～5中任一項所述提升水稻籽粒淀粉品質的方法，其特征在于，所述B.轉化農桿菌的建立，進一步包括：

(1)、誘導；

(2)、繼代；

(3)、預培養；

(4)、農桿菌培養；

(5)、侵染；

(6)、篩選；

(7)、分化；

(8)、生根；

(9)、移栽。

7.根據權利要求6所述提升水稻籽粒淀粉品質的方法，其特征在于，所述B.轉化農桿菌的建立，進一步包括：

(1)、誘導：將成熟的水稻種子去殼，然后依次用70％體積比的乙醇處理1min，2％濃度的次氯酸鈉種子表面消毒15min；用滅菌水洗種子4-5次；將種子放在粳稻誘導培養基上；將接種后的培養基放置于黑暗處培養4周，溫度26℃。

8.根據權利要求6所述提升水稻籽粒淀粉品質的方法，其特征在于，所述B.轉化農桿菌的建立，進一步包括：

(2)、繼代：挑選亮黃色、緊實且相對干燥的胚性愈傷，放于粳稻繼代培養基上黑暗，26℃條件下培養2-3周。

9.根據權利要求6所述提升水稻籽粒淀粉品質的方法，其特征在于，所述B.轉化農桿菌的建立，進一步包括：

(3)、預培養：挑選緊實且相對干燥的胚性愈傷，放于粳稻預培養基上黑暗，26℃條件下培養4-5天。

10.根據權利要求6所述提升水稻籽粒淀粉品質的方法，其特征在于，所述B.轉化農桿菌的建立，進一步包括：

(4)、農桿菌培養：在帶有卡那霉素抗性選擇的PEB培養基上預培養農桿菌株兩天，溫度28℃；刮取農桿菌至懸浮培養基中懸浮培養，培養溫度為28℃。